[發明專利]一種抗腫瘤樹突狀細胞及其制備方法、表達載體及應用

有效

• 申請號: 202210295417.X
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114621929B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 李冬貝;魏旭東;李海軍;范瑞華;米瑞華;陳琳;程誠
• 申請（專利權）人: 河南省腫瘤醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0784;C12N15/867;C12N15/12;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發明屬于免疫細胞的改造領域，具體涉及一種抗腫瘤樹突狀細胞及其制備方法、表達載體及應用。該抗腫瘤樹突狀細胞為經synNotch受體改造的樹突狀細胞，synNotch受體包括PD?1胞外域，Notch跨膜域和轉錄調節模塊Gal4?VP64；所述抗腫瘤樹突狀細胞內引入轉錄調控模塊GAL4?UAS?TRAF6。本發明的抗腫瘤樹突狀細胞，胞外表達PD?1受體胞外域，胞內表達應答系統Gal4?UAS?TRAF6；該種細胞通過PD?1來與PD?L1陽性的腫瘤細胞精準結合，結合之后方啟動胞內應答系統，使TRAF6過表達，促進腫瘤微環境中樹突狀細胞成熟，解除對其抑制作用。

技術領域

本發明屬于免疫細胞的改造領域，具體涉及一種抗腫瘤樹突狀細胞及其制備方法、表達載體及應用。

背景技術

腫瘤一直是人類生命的重大威脅，傳統的放、化療等方法療效有限。免疫治療的興起打破了腫瘤治療的僵局，如嵌合抗原受體T胞免疫療法(chimeric?antigen?receptor?T-cell?immunotherapy，CAR-T)，程序性死亡受體1(PD-1)/程序性死亡配體1(PD-L1)免疫檢查點抑制劑。2017年CAR-T治療產品CTL019獲FDA批準應用于淋巴瘤的臨床治療，2018年PD-1免疫抑制受體的發現者共享了諾貝爾生理學或醫學獎。但是對于實體瘤和復發難治性腫瘤，目前的技術方法的作用受限于以下幾點：(1)腫瘤相關抗原的多樣性；(2)腫瘤微環境的免疫抑制作用；(3)脫靶效應。

樹突狀細胞(dendritic?cell,DC)是最有效的抗原提呈細胞(antigenpresenting?cells，APC)，它的主要功能是誘導初始型T細胞活化和增殖，進而啟動適應性免疫應答，介導免疫應答，進而在腫瘤等過程中扮演重要角色。目前，基于DC的免疫療法在腫瘤的治療中取得一定的療效，主要是裝載有腫瘤抗原的DC疫苗療法和基因修飾DC疫苗。美國FDA在2010年5月批準了首個前列腺癌癥治療性疫苗Provenge(DC疫苗)上市銷售，采用Provenge治療后3年總體生存期比對照組延長37％，被認為是腫瘤個體化免疫治療取得的重大突破。2014年2月我國CFDA正式批準了曹雪濤院士團隊的APDC(抗原致敏的人樹突狀細胞)生產上市，用于晚期大腸癌的治療。對DC進行基因修飾也是常用的技術方法。將促進DC細胞成熟和遷移的細胞因子等基因轉染DC，可增強其介導抗腫瘤功能(姚冰清,張俊萍.基于樹突狀細胞的抗腫瘤策略與思考[J].中國癌癥防治雜志,2016,8(01):55-58.)。

腫瘤細胞通過釋放和表達免疫抑制性分子，如PD-L1等促進細胞凋亡和抑制腫瘤效應細胞。隨著腫瘤的進展，受多種抑制分化、成熟及功能的腫瘤源性因子的影響，DC會由免疫激活作用轉向免疫抑制作用。腫瘤浸潤樹突狀細胞(TIDC)表現出低共刺激分子表達的表型，抗原提呈能力減弱[3]。TIDC不僅發育成熟障礙，細胞數量也減少。循環腫瘤、腫瘤床、引流淋巴結等多種腫瘤模型均證明，惡性腫瘤患者體內成熟DC的數量減少(Ma?Y,ShurinGV,Peiyuan?Z,Shurin?MR.Dendritic?Cells?in?the?Cancer?Microenvironment.Cancer，2013,4(3):36-44.)。

總之，由于缺乏明確的特異性腫瘤相關抗原，腫瘤微環境(tumormicroenvironment,TME)中免疫抑制因素的存在和對正常細胞的脫靶效應等原因，目前基于DC的免疫治療尚未取得顯著、廣泛的臨床療效，如何克服這些難點將是未來新的DC免疫療法發展的方向。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗腫瘤樹突狀細胞，既能夠精準識別腫瘤細胞，而非正常細胞，同時又能夠減輕腫瘤微環境對其免疫抑制作用，促使抗腫瘤免疫應答正常化。

本發明的第二個目的是提供上述抗腫瘤樹突狀細胞的制備方法。

本發明的第三個目的是一種用于改造樹突狀細胞的表達載體。

本發明的第四個目的是提供上述抗腫瘤樹突狀細胞、表達載體在制備抗腫瘤藥物方面的應用。