[發(fā)明專(zhuān)利]一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210294313.7
• 申請(qǐng)日: 2022-03-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115044068A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鵬飛;王少云;孫小六;楊金華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州星譜生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08J3/12
• 分類(lèi)號(hào): C08J3/12;C08J3/24;C08L51/02;C08F251/00;C08F216/14;C08F220/20;C08F222/14;B01J13/14
• 代理公司: 北京中仟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11825
• 代理人: 周慶佳

本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)層析填料的制備領(lǐng)域，尤其是一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法，包括以下步驟：S1：在80℃～120℃將瓊脂糖溶于水中，得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％～15％的瓊脂糖水溶液，作為水相，將水相加入到含乳化劑的油相中，在55℃～80℃攪拌乳化0.5h～2h后，降溫至25℃以下固化0.5～2h，得到瓊脂糖微球；S2：將上述瓊脂糖微球與烯丙基改性劑加入到濃度為0.1mol/L～4mol/L的氫氧化鈉溶液中，在30℃～50℃和攪拌速度為150rpm～300rpm下反應(yīng)8～24h，再使用無(wú)水乙醇洗滌3～5次，得到烯丙基化的瓊脂糖微球。本發(fā)明瓊脂糖微球制備過(guò)程簡(jiǎn)單，無(wú)需多步或重復(fù)的交聯(lián)的過(guò)程，并且能較明顯地提升瓊脂糖微球的強(qiáng)度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)層析填料的制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法。

背景技術(shù)

天然多糖具有良好的親水性和生物相容性，其與蛋白不產(chǎn)生非特異性結(jié)合，能夠維持蛋白的構(gòu)相，保持蛋白的活性。多糖基質(zhì)的蛋白純化填料是目前蛋白質(zhì)分離純化工業(yè)使用的最主要的填料之一。

瓊脂糖是由1.3-鏈接的β-D-吡喃半乳糖和1,4-連接的3.6-脫水-α-L吡喃半乳糖殘基交替連接而成的線(xiàn)性復(fù)合多糖。在加熱時(shí)，分子鏈解離，形成均相的溶液，當(dāng)溫度降低時(shí)，形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，然后聚集成膠束。通過(guò)調(diào)控瓊脂糖溶液的濃度，可得到孔徑不同的瓊脂糖凝膠微球。瓊脂糖微球具有天然的大孔結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，生物相容性好，可再生性強(qiáng)，是目前最主要的多糖類(lèi)填料，在實(shí)驗(yàn)室研發(fā)和大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用。

隨著近年國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥行業(yè)和體外診斷等行業(yè)的快速發(fā)展，蛋白純化填料的市場(chǎng)需求也隨著變大。當(dāng)前生物醫(yī)藥的迅速發(fā)展,人們對(duì)蛋白類(lèi)藥物的需求量日益增長(zhǎng)，同時(shí)也對(duì)蛋白分離純化的技術(shù)提出了挑戰(zhàn)。快速、高效的分離純化技術(shù)是必然的發(fā)展需求，其中的層析介質(zhì)是一個(gè)核心技術(shù)。其中蛋白純化是生物藥生產(chǎn)的核心環(huán)節(jié)，決定產(chǎn)品的質(zhì)量，也決定著整個(gè)下游生產(chǎn)成本的高低。目前制備高流速和高耐壓的主要思路是通過(guò)對(duì)瓊脂糖微球進(jìn)行多次交聯(lián)，提升基球的剛性。其中中國(guó)專(zhuān)利CN106432816B中，采用溴丙烯或烯丙基縮水甘油醚對(duì)降解的瓊脂糖進(jìn)行改性，再與未降解的瓊脂糖混合后進(jìn)行乳化制備瓊脂糖微球，之后再通過(guò)溴化反應(yīng)進(jìn)一步交聯(lián)，為了提升強(qiáng)度，后續(xù)采用環(huán)氧氯丙烷進(jìn)行交聯(lián)，制備出高強(qiáng)度微球。美國(guó)專(zhuān)利US6602990B1中采用了烯丙基縮水甘油醚對(duì)瓊脂糖進(jìn)行改性，然后乳化成球后，再進(jìn)行多次溴化交聯(lián)，或采用環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)制備高強(qiáng)度微球。

但是其瓊脂糖微球制備過(guò)程復(fù)雜，需要多步或重復(fù)的交聯(lián)的過(guò)程，不能夠滿(mǎn)足使用需要，因此提出了一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法用于解決上述問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種高強(qiáng)度瓊脂糖微球的制備方法，包括以下步驟：

S1：在80℃～120℃將瓊脂糖溶于水中，得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％～15％的瓊脂糖水溶液，作為水相，將水相加入到含乳化劑的油相中，在55℃～80℃攪拌乳化0.5h～2h后，降溫至25℃以下固化0.5～2h，得到瓊脂糖微球；

S2：將上述瓊脂糖微球與烯丙基改性劑加入到濃度為0.1mol/L～4mol/L的氫氧化鈉溶液中，在30℃～50℃和攪拌速度為150rpm～300rpm下反應(yīng)8～24h，再使用無(wú)水乙醇洗滌3～5次，得到烯丙基化的瓊脂糖微球；

S3：將得到的烯丙基化瓊脂糖微球與單體和引發(fā)劑加入到有機(jī)溶劑中，30～50℃反應(yīng)12～24h，再使用無(wú)水乙醇洗滌3次，得到高強(qiáng)度瓊脂糖微球。

優(yōu)選的，所述S1中，油相是甲苯、液體石蠟和環(huán)己烷中的一種。

優(yōu)選的，所述S1中，乳化劑為Span80，乳化劑質(zhì)量為油相質(zhì)量的1％～8％。