[發(fā)明專利]一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210291018.6
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114617064B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設計）人: 林亮;馬俊超;徐倩;賈艷霞;李唯奇;陳虹穎
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發(fā)明涉及紅花山玉蘭種質(zhì)保存技術領域，特別是涉及一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法。本發(fā)明所述紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法利用胚性愈傷組織在適宜的裝載溶液中進行裝載處理，并在適宜的玻璃化溶液中進行玻璃化處理從而完成超低溫保存。本發(fā)明提供的方法相比于現(xiàn)有的原地建立保護區(qū)存、遷地保存，具有永久保存、不受自然環(huán)境變化的影響、保存效率高、遺傳穩(wěn)定性高和方便管理的優(yōu)勢。另外，保存的玻璃化愈傷組織再生后可以快速進行增殖和分化，分化的體細胞胚直接發(fā)育成植株，且轉(zhuǎn)化率高，無需進行生根培養(yǎng)。本發(fā)明超低溫保存的再生率為90％，能夠長期對紅花山玉蘭種質(zhì)資源進行超低溫保存。

技術領域

本發(fā)明涉及紅花山玉蘭種質(zhì)保存技術領域，特別是涉及一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法。

背景技術

紅花山玉蘭(Magnolia delavayi)是木蘭科木蘭屬山玉蘭中的一個變種。樹形態(tài)優(yōu)美，葉形秀麗，花大艷麗呈紅色，具有香味，有一定的抗污效果，是優(yōu)良的庭院景觀、城市綠化樹種。目前，云南省已將其作為鄉(xiāng)土樹種收錄于《云南省城市綠化樹種名錄》，并在滇中、滇西、滇西北和滇東南等地作為行道樹和觀賞樹應用于城市綠化。

目前紅花山玉蘭的繁殖方式主要為種子育種。紅花山玉蘭種群數(shù)量較少，本身產(chǎn)生的種子就少。再加上紅花山玉蘭是雌雄異熟，阻礙了昆蟲的傳粉，自然狀態(tài)下結實率低，而且結實容易受到氣候條件和生境的影響，想要獲得大量的種子用于植株繁殖存在一定的困難。由于自然條件的變化，資源和分布急劇下降，現(xiàn)已被列為國家二級保護野生植物。因此紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存成為了紅花山玉蘭的可持續(xù)利用的關鍵。目前對于紅花山玉蘭的種質(zhì)資源保存多是通過建立保護區(qū)，和遷地引種保存。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法。本發(fā)明提供的方法簡便易行、穩(wěn)定性高、高效可靠，利用胚性愈傷組織的分化能力，經(jīng)保存后，還能快速大量的分化成紅花山玉蘭體細胞胚，并進一步的發(fā)育成完整植株，且植株移栽后生長狀態(tài)良好。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

本發(fā)明提供了一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法，包括以下步驟：

(1)將紅花山玉蘭胚性愈傷組織與裝載溶液混合進行裝載處理，得裝載愈傷組織；所述裝載溶液包括：WPM基礎培養(yǎng)基、甘油184g/L和蔗糖136.8g/L；

(2)將所述裝載愈傷組織與玻璃化溶液混合進行玻璃化處理，得玻璃化愈傷組織；所述玻璃化溶液包括WPM基礎培養(yǎng)基、甘油300g/L、乙二醇150g/L、二甲基亞砜150g/L和蔗糖0.4mol/L；

(3)將所述玻璃化愈傷組織置于液氮中保存。

優(yōu)選的，步驟(1)所述紅花山玉蘭胚性愈傷組織的制備方法包括：將紅花山玉蘭種子在誘導培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)4月，每隔1月?lián)Q一次培養(yǎng)基所述誘導培養(yǎng)基以WPM為基礎培養(yǎng)基，還包括以下組分：2,4-D 2mg/L、6-BA 0.25mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1g/L、水解酪蛋白1g/L、蔗糖40g/L和植物凝膠3g/L，所述誘導培養(yǎng)基的pH值為5.8；

優(yōu)選的，所述誘導培養(yǎng)為暗培養(yǎng)，所述誘導培養(yǎng)的溫度為25℃。

優(yōu)選的，步驟(1)所述混合時，所述紅花山玉蘭胚性愈傷組織與裝載溶液的體積比為1:8。

優(yōu)選的，步驟(2)所述混合時，所述裝載愈傷組織與玻璃化溶液的體積比為1:8。

優(yōu)選的，步驟(2)所述玻璃化處理的溫度為0～4℃，所述玻璃化處理的時間為30min。

優(yōu)選的，步驟(3)所述保存的時間至少為24h。

優(yōu)選的，在步驟(3)所述保存后，還包括對經(jīng)過保存的愈傷組織進行恢復。

優(yōu)選的，所述恢復的方法，包括以下步驟：