[發(fā)明專利]一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210291018.6 | 申請日： | 2022-03-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN114617064B | 公開（公告）日： | 2022-12-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 林亮;馬俊超;徐倩;賈艷霞;李唯奇;陳虹穎 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院昆明植物研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務(wù)所 11569 | 代理人： | 蘇士瑩 |
| 地址： | 650201 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 紅花 玉蘭 種質(zhì) 資源 保存 方法 | ||
1.一種紅花山玉蘭種質(zhì)資源的保存方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將紅花山玉蘭胚性愈傷組織與裝載溶液混合進(jìn)行裝載處理，得裝載愈傷組織；所述裝載溶液包括：WPM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、甘油184g/L和蔗糖136.8g/L；
所述紅花山玉蘭胚性愈傷組織的制備方法包括：將紅花山玉蘭種子在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)4月，每隔1月?lián)Q一次培養(yǎng)基；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基以WPM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還僅含有以下組分：2,4-D 2mg/L、6-BA 0.25mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1g/L、水解酪蛋白1g/L、蔗糖40g/L和植物凝膠3g/L，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.8；
所述紅花山玉蘭胚性愈傷組織與裝載溶液的體積比為1:8；
(2)將所述裝載愈傷組織與玻璃化溶液混合進(jìn)行玻璃化處理，得玻璃化愈傷組織；所述玻璃化溶液包括WPM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、甘油300g/L、乙二醇150g/L、二甲基亞砜150g/L和蔗糖0.4mol/L；所述裝載愈傷組織與玻璃化溶液的體積比為1:8；
(3)將所述玻璃化愈傷組織置于液氮中保存；所述保存后，還包括對(duì)經(jīng)過保存的愈傷組織進(jìn)行恢復(fù)；
所述恢復(fù)的方法，包括以下步驟：
(a)將所述經(jīng)過保存的愈傷組織置于40℃水浴中解凍；
(b)將解凍后的愈傷組織與卸載溶液混合后，進(jìn)行卸載處理，得卸載愈傷組織；所述卸載溶液包括WPM基礎(chǔ)培養(yǎng)基和蔗糖410.4g/L，所述卸載溶液的pH值為5.8；
(c)將所述卸載愈傷組織轉(zhuǎn)移到所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行恢復(fù)培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)為暗培養(yǎng)，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度為25℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于，步驟(2)所述玻璃化處理的溫度為0～4℃，所述玻璃化處理的時(shí)間為30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于，步驟(3)所述保存的時(shí)間至少為24h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保存方法，其特征在于，在步驟(c)所述轉(zhuǎn)移前，還包括利用WPM液體培養(yǎng)基清洗所述卸載愈傷組織，再將清洗后的卸載愈傷組織與WPM液體培養(yǎng)基混合，最后除去所述WPM液體培養(yǎng)基。
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