[發(fā)明專利]一種土瓶草組織培養(yǎng)方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210290261.6
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114557280B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊燕;唐宗英;李雪娟;鄒明宇;李勇;許志成
• 申請（專利權(quán)）人: 云南林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院;云南華衡檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明盈正知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 53208
• 代理人: 徐洪剛

本發(fā)明涉及食蟲植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體來說是一種土瓶草組織培養(yǎng)方法及應(yīng)用，步驟包括：(1)外植體消毒：選取土瓶幼嫩普通葉作為外植體，在超凈臺上進(jìn)行消毒；(2)叢生芽誘導(dǎo)：將消毒好的外植體，接種在叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(3)叢生芽增殖：將誘導(dǎo)出的叢生芽，切成單芽，接種在叢生芽增殖培養(yǎng)基上；(4)叢生芽生根：將通過誘導(dǎo)或增殖獲得的叢生芽，接種在生根培養(yǎng)基上。本發(fā)明是利用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行土瓶草種苗的生產(chǎn)，屬于工業(yè)化生產(chǎn)，不受天氣、季節(jié)等影響，可在短期內(nèi)大量獲得種苗；本發(fā)明是利用植物的體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)繁，屬于無性繁殖范疇，使其遺傳性狀能最大程度的穩(wěn)定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食蟲植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體來說是一種土瓶草組織培養(yǎng)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

土瓶草(Cephalotus follicularis)又名澳洲瓶子草，囊葉草，屬于土瓶草科土瓶草屬多年生草本植物，是一種非常特殊的低矮型食蟲植物，原產(chǎn)于澳大利亞西南海岸一帶地區(qū)的沃倫生態(tài)區(qū)、賈拉森林及埃斯佩蘭斯平原等地，生長環(huán)境為沼澤和潮濕地帶。土瓶草利用其華麗的外表，引誘獵物掉入瓶內(nèi)，使其溺死在消化液中，最終被消化液分解，被瓶內(nèi)腺體吸收。由于俏麗的外觀形狀，土瓶草已經(jīng)被世界各地作為觀賞植物引種，我國亦在21世紀(jì)初進(jìn)行了引種，我國目前人工栽培主要集中在浙江、云南、四川、福建、廣東等省市。

目前土瓶草繁殖主要有種子繁殖、分株繁殖、葉插繁殖，土瓶草開花后必須進(jìn)行異花授粉才具有繁殖特性，使得自然條件下結(jié)籽率低，同時(shí)，花卉最重要的是外觀性狀穩(wěn)定性，而異花授粉常常導(dǎo)致株間雜交，使得其外觀性狀具有較大的改變。因此，分株繁殖及葉插繁殖成為了土瓶繁殖的主流。但不論是分株繁殖還是葉插繁殖，均存在繁殖周期長，繁殖成功率低，繁殖系數(shù)低等缺點(diǎn)。

針對現(xiàn)有種子繁殖結(jié)籽率低，品種遺傳穩(wěn)定性以及分株和葉插繁殖繁殖周期長、繁殖系數(shù)低、繁殖成功率低等技術(shù)的不足，發(fā)明了一種利用現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行土瓶草種苗繁育的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對背景技術(shù)中存在的問題，提供一種土瓶草組織培養(yǎng)方法及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種土瓶草組織培養(yǎng)方法，步驟包括：

(1)外植體的選擇與清潔：選擇土瓶草基部未形成“瓶”的普通葉作為外植體，用飽和肥皂液涮洗5～10min，自來水漂洗2～3次后，滴加1～2滴吐溫-80，震搖10～15min，自來水沖淋30～40min；

(2)外植體的消毒：將清潔好的外植體，轉(zhuǎn)移至超凈臺上，用75％酒精溶液消毒15～20s，無菌水涮洗3～4次，用滴加2～3滴吐溫-80的0.08％升汞溶液消毒5～6min，無菌水涮洗5～6次；

(3)叢生芽的誘導(dǎo)：將消毒好的外植體，用無菌紙吸去表面水分，剪去傷口，并將其剪成長約1cm大小，平鋪于1/2MS+NAA0.05～0.1mg/L+2,4-D 0.02～0.05mg/L+2-IP 0.5～0.8mg/L+活性炭0.7g/L的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為25±2℃，光照強(qiáng)度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替環(huán)境下培養(yǎng)60～90天；

(4)叢生芽的增殖：將誘導(dǎo)出的叢生芽，切成單芽，接種在改良MS+NAA0.1～0.15mg/L+KT 4.0～5.0mg/L+BR 0.05～0.08mg/L+活性炭0.5g/L的叢生芽增殖培養(yǎng)基上，在溫度為25±2℃，光照強(qiáng)度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替環(huán)境下培養(yǎng)40～60天；

(5)叢生芽的生根：將通過誘導(dǎo)或增殖獲得的叢生芽，接種在1/2改良MS+NAA 0.4～0.6mg/L+IBA0.8～1.2mg/L+GA3 0.2～0.4mg/L+活性炭0.5g/L的生根培養(yǎng)基上，在溫度為25±2℃，光照強(qiáng)度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替環(huán)境下培養(yǎng)30～40天；