[發明專利]高產PHA的基因重組菌及其構建方法

有效

• 申請號: 202210280731.0
• 申請日: 2022-03-22
• 公開（公告）號: CN114381415B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 尹進;王禺;張樺宇;李英滋
• 申請（專利權）人: 深圳藍晶生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/31;C12P7/64;C12P7/62
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

1.一種重組富養羅爾斯通氏菌，其特征在于，所述重組富養羅爾斯通氏菌的基因組中引入了上調phaJ基因的啟動子，所述上調phaJ基因的啟動子的序列是phaJ43啟動子序列SEQ ID NO.3；所述重組富養羅爾斯通氏菌基因組中的原始phaC基因和proC基因失活，所述原始phaC基因的序列如SEQ ID NO.1所示，所述原始proC基因的序列如SEQ ID NO.2所示；所述重組富養羅爾斯通氏菌中還引入了在富養羅爾斯通氏菌中穩定存在的質粒，所述質粒上裝載有引入的phaC突變基因和引入的proC基因，其中所述引入的phaC突變基因的序列如SEQ ID NO.5 所示，所述引入的phaC突變基因的表達使得所述重組富養羅爾斯通氏菌合成3-羥基丁酸與3-羥基己酸共聚酯，所述引入的proC基因的序列如SEQ ID NO.4所示；

所述重組富養羅爾斯通氏菌的出發菌為富養羅爾斯通氏菌Re0980，所述富養羅爾斯通氏菌Re0980的保藏編號為GDMCC No：62177。

2.根據權利要求1所述的重組富養羅爾斯通氏菌，其特征在于，所述原始phaC基因和proC基因的失活通過敲除原基因組phaC和原基因組proC基因實現。

3.根據權利要求1或2所述的重組富養羅爾斯通氏菌，其特征在于，所述重組富養羅爾斯通氏菌為菌株BPS-050，保藏編號為CGMCC No. 23600。

4.一種制備重組富養羅爾斯通氏菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：以富養羅爾斯通氏菌為出發菌，在所述富養羅爾斯通氏菌基因組中引入上調phaJ基因的啟動子，所述上調phaJ基因的啟動子的序列是phaJ43啟動子序列SEQ ID NO.3；所述重組富養羅爾斯通氏菌基因組中的原始phaC基因和proC基因失活；所述原始phaC基因的序列如SEQ ID NO.1所示，所述原始proC基因的序列如SEQ ID NO.2所示；所述重組富養羅爾斯通氏菌中還引入了在富養羅爾斯通氏菌中穩定存在的質粒，所述質粒上裝載有引入的phaC 突變基因和引入的proC基因，其中所述引入的phaC突變基因的序列如SEQ ID NO.5 所示，所述引入的phaC突變基因的表達使得所述重組富養羅爾斯通氏菌合成3-羥基丁酸與3-羥基己酸共聚酯，所述引入的proC基因的序列如SEQ ID NO.4所示；

所述出發菌為富養羅爾斯通氏菌Re0980，所述富養羅爾斯通氏菌Re0980的保藏編號為GDMCC No：62177。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）以富養羅爾斯通氏菌Re0980為出發菌，敲除基因組中的原始phaC和proC基因，所述敲除通過分別構建phaC基因敲除質粒和proC基因敲除質粒進行，所述原始phaC基因的序列如SEQ ID NO.1所示，且所述原始proC基因的序列如SEQ ID NO.2所示；

（2）在所述富養羅爾斯通氏菌基因組中引入上調phaJ基因的啟動子，所述上調phaJ基因的啟動子序列是phaJ43 啟動子序列SEQ ID NO.3；

（3）引入在富養羅爾斯通氏菌中穩定存在的質粒，所述質粒上裝載有引入的phaC突變基因和引入的proC基因，其中所述引入的phaC突變基因的序列如SEQ ID NO.5所示，并且所述引入的proC基因的序列如SEQ ID NO.4所示。