[發明專利]用于測定氧化三甲胺的試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210279485.7
• 申請日: 2022-03-22
• 公開（公告）號: CN114371239B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 侯利平;王婷;朱永瑞;陽艷;李超鵬;李曉暉;歐陽冬生
• 申請（專利權）人: 長沙都正醫學檢驗有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/04
• 代理公司: 北京信諾創成知識產權代理有限公司 11728
• 代理人: 廖曉霞;陳悅軍

本發明提供用于測定氧化三甲胺的試劑盒及其制備方法和應用，本發明提供的試劑盒能夠有效解決溶液工藝制備的試劑盒穩定性不佳的現狀，且能實現內標物的可凍干和長期穩定性。所述試劑盒包括系列氧化三甲胺校準品和氘代氧化三甲胺內標品；所述系列氧化三甲胺校準品為具有濃度梯度的系列氧化三甲胺校準品工作液的凍干物，所述系列氧化三甲胺校準品工作液為已知濃度的氧化三甲胺標準品溶液用基質溶液稀釋而成的具有濃度梯度的氧化三甲胺校準品工作液；所述氘代氧化三甲胺內標品為已知濃度的氘代氧化三甲胺標準品溶液用基質溶液稀釋而成的具有預定濃度的氘代氧化三甲胺內標品工作液的凍干物；基質溶液中的基質為血清白蛋白。

技術領域

本發明涉及內源性生物標志物的檢測技術領域，特別涉及一種測定氧化三甲胺的試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術

作為一種內源性生物標志物，氧化三甲胺（TMAO）也同其他的生物標志物（biomarker）一樣，需要首先解決基質的干擾，才能確保定量的準確性。因此在選擇合適的基質時，研發人員往往會采取2種主要方式：

1）扣除零濃度空白血基質，即選擇混合血作為基質，將不同濃度的校準品、質控品分別與零濃度混合血基質相減，去掉混合血基質中本身存在的TMAO干擾，然后再進行曲線擬合以及開展樣本的含量測定。這個做法雖然保證了基質的“原汁原味”，但忽略了樣本間的TMAO含量存在顯著差異，且混合基質也存在批間的不一致性的事實，加上混合人血基質的獲得來源和倫理受到諸多限制，因此難以應用到如開發體外診斷試劑盒（IVD）的產業化上。該做法主要是用于實驗室研發以及臨床試驗階段，參考文獻2即采用的該模式用于建立1種TMAO定量方法開發。

2）采用非血源的替代基質，通過選擇血液中的高蛋白組分，如人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）等作為替代基質，保證校準品、質控品的基質中不存在除TMAO標準品之外的其他內源性TMAO。同時，借助同位素標記的TMAO作為內標，可抵消替代基質與人源血基質之間的背景響應差異，從而真正意義上杜絕內源性TMAO的干擾，也可實現不同待測樣本間的不同含量的TMAO被全部檢出。此外，替代基質的來源易得，成分簡單，質量易控，因此該做法常常用于生物標志物的IVD產品開發。參考文獻1選擇HSA作為替代基質，開發了TMAO的定量試劑盒，初始檢驗性能合格。綜合來看，在產品開發中，替代基質的做法往往更容易保證TMAO的定量準確度。

由于替代基質基本屬于蛋白類，容易受到溫度、濕度等物理條件影響而發生降解、聚合、霉變等情況，因此品種、來源和純度這些因素是在考察基質的穩定性時需重點考慮的。HSA和BSA作為最常使用的替代基質，在TMAO產品化中需要首先考察它們的穩定性，如采用37℃加速試驗、凍融試驗、復溶試驗等極端條件來檢驗基質的穩定性對TMAO測定的精密度和準確度的影響。只有通過穩定性測試的基質，才能進一步用于TMAO產品的工藝開發中。即使獲得穩定性好的基質時，面對不同工藝的處理，對待測物的影響也是截然不同的。

參考文獻：

[1] 李曉輝，李瑩，余鵬，等. 一種氧化三甲胺定量檢測試劑盒及方法[P]，CN201710502265.5。

[2] 劉燕，譚栩穎，許斌，等. 血清中氧化三甲胺的高效液相色譜串聯質譜法測定研究[J].華南預防醫學，2015,41(3):207-212。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種用于測定氧化三甲胺的改進型試劑盒，該試劑盒能夠有效解決溶液工藝制備的試劑盒穩定性不佳的現狀，且能實現內標物的可凍干和長期穩定性。

本發明為達到其目的，提供如下技術方案：

本發明一方面提供一種用于測定氧化三甲胺的試劑盒，所述試劑盒包括系列氧化三甲胺校準品和氘代氧化三甲胺內標品；