[發(fā)明專利]一種膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210273656.5
• 申請(qǐng)日: 2022-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN114558130A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫欣怡;王友偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西博生生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/395
• 分類號(hào): A61K39/395;A61K47/32;A61P17/10;A61P31/04;C07K16/02;C07K16/12;A61K38/39
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1.一種膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1：制備抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白；

S2：按重量百分比計(jì)，稱取組合制劑制備用原料：包括抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白0.1-2%、重組三型膠原蛋白0.01-2%、防腐劑0.1-2%、甘油1-10%、中和劑0.1-3%、保濕劑0.01-2%、卡波姆0.1-2%、余量為水；

S3：制備組合制劑：

S3.1：取1/2-3/4體積的水，加入抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白和重組三型膠原蛋白，第一次攪拌混合后，加入甘油和中和劑繼續(xù)第二次攪拌混合，得均一溶液經(jīng)真空脫泡后保溫備用；

S3.2：將卡波姆加剩余水充分分散后，加入防腐劑、保濕劑，第一次攪拌混合均勻后，加入步驟S3.1中的均一溶液，第二次攪拌混合，即得所需的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中制備抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白，具體包括以下操作：準(zhǔn)備抗原、佐劑配伍形成免疫疫苗、雞接種疫苗、蛋黃分割和抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白分離。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述準(zhǔn)備抗原，具體操作如下：首先進(jìn)行痤瘡丙酸桿菌的培養(yǎng)，然后利用甲醛法滅活痤瘡丙酸桿菌，制備獲得痤瘡丙酸桿菌抗原。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述佐劑配伍形成免疫疫苗具體指：按質(zhì)量比1:1，將痤瘡丙酸桿菌抗原與佐劑充分乳化制得免疫疫苗；所述佐劑由質(zhì)量比1.2-1.7:4.5-6.5:0.3-0.8:1.5-3的羥基磷灰石、0.8-1.5mol/L磷酸溶液、酪蛋白酸鈉和甘油二酯混合復(fù)配而得。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述雞接種疫苗的接種方案如下：共免疫3次，每次間隔3-4周，初次免疫和第二次免疫的免疫劑量為0.025mg/只；第二次免疫后1周，采集雞蛋，并做好標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)；第三次免疫的免疫劑量為0.25mg/只，第三次免疫后1周，采集雞蛋，并做好標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白分離具體指：將經(jīng)蛋黃分割獲得的卵黃加7-10倍的去離子水，于32-45℃的溫度下，邊攪拌邊調(diào)節(jié)pH值至5.7-6.5，攪拌均勻后靜置收集上清液，將上清液經(jīng)超濾膜過濾提純，即得所需的抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中重組三型膠原蛋白為重組人源三型膠原蛋白；

防腐劑包括質(zhì)量比1:4-7的三氯叔丁醇和綠原酸；

中和劑包括質(zhì)量3-8:1:1-3的大豆卵磷脂、黃芪多糖和海藻酸鈉；

保濕劑為三甲基甘氨酸或乳酸鈉。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中按重量百分比計(jì)，原料包括：抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白1%、重組三型膠原蛋白1%、防腐劑0.8%、甘油7%、中和劑2%、保濕劑1.2%、卡波姆1%、余量為水。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S3.1中攪拌混合溫度均為20-40℃，攪拌混合轉(zhuǎn)速均為100-300r/min，第一次攪拌混合時(shí)間為30-50min，第二次攪拌混合時(shí)間為1-2h。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原蛋白與抗痤瘡丙酸桿菌γ蛋白組合制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S3.2中攪拌混合溫度均為20-40℃，第一次攪拌混合轉(zhuǎn)速為100-300r/min，第一次攪拌混合時(shí)間為20-40min，第二次攪拌混合轉(zhuǎn)速為10-50r/min，第二次攪拌混合時(shí)間為1-2h。