[發(fā)明專利]一種與花生白種皮緊密連鎖的分子標(biāo)記AhyWptc及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210270304.4
• 申請日: 2022-03-18
• 公開（公告）號: CN114525364B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏晗;黃懷玲;鄧麗;王興軍;趙傳志;任麗;馬婧;田銳錚;張憲英;侯蕾;李陽
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院;開封市農(nóng)林科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張換君

本發(fā)明公開了一種與花生白種皮緊密連鎖的分子標(biāo)記AhyWptc及其應(yīng)用，涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域；所述分子標(biāo)記AhyWptc的特異性引物對為SEQ ID NO：1所示的正向引物和SEQ ID NO：2所示的反向引物。利用本發(fā)明提供的分子標(biāo)記AhyWptc，可以通過檢測子葉的DNA提前確定下一代收獲材料的種皮顏色，將其應(yīng)用到分子育種及改良花生品種中，從而可以大大縮短育種時(shí)間，提高育種效率，可以在更短的時(shí)間內(nèi)獲取更多更優(yōu)異的花生種質(zhì)資源。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種與花生白種皮緊密連鎖的分子標(biāo)記AhyWptc及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

花生是我國重要的油料和經(jīng)濟(jì)作物，是植物油脂和蛋白的重要來源。花生中富含脂肪酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、膳食纖維、維生素E和礦物質(zhì)(鈣、鐵、鋅、硒)等微量元素，同時(shí)還含有大量的生理活性物質(zhì)如白藜蘆醇和酚類物質(zhì)等，花生具有較高的氧化穩(wěn)定性，適用于食品和工業(yè)應(yīng)用(張智猛等，2009)。花生的種皮顏色以粉紅色和紅色為主，白種皮的花生品種較少。白皮花生榨出油呈淺黃色透明，經(jīng)加溫處理顏色不變，不需脫色處理。這一特性能夠提高花生油品質(zhì)，降低生產(chǎn)成本，對花生食品加工有重要意義(莊建偉，1998)。近年來，由于種皮顏色的特殊性及花生食品加工業(yè)生產(chǎn)成本等原因，白皮花生的市場需求日益增加。然而，現(xiàn)有的白皮花生品種較少，而且豐產(chǎn)性還不夠理想，難以大面積種植與推廣。因此，提高白皮花生的產(chǎn)量是滿足市場需求的根本途徑。

花生種皮由珠被發(fā)育而來，與其他性狀相比，花生種皮顏色需要在隔代才能顯現(xiàn)出來，例如，粉紅種皮做母本與白皮花生做父本進(jìn)行雜交，F(xiàn)1代的種皮是粉紅色的， F2代的種皮是淡粉(雙親中間型)的，F(xiàn)3代的種皮才會出現(xiàn)性狀分離。這一特性極大的限制了采用傳統(tǒng)育種手段培育白色種皮花生。分子標(biāo)記輔助育種以基因型的鑒定為主，對于白種皮性狀來說，可以通過切去種子的一部分子葉，檢測子葉的基因型來提前確定下一代收獲材料的種皮顏色，能夠縮短白花生新品種的育種周期，大大提高育種效率。

國內(nèi)外關(guān)于花生白種皮遺傳的研究相對較少。早期文獻(xiàn)中，花生白色種皮顏色被發(fā)現(xiàn)由兩組隱性基因控制(Higgins，1940；Hammons，1963)。1988年，Norden等人在佛羅里達(dá)州的一個(gè)種子田中發(fā)現(xiàn)兩個(gè)白籽珍珠“Early Runner”花生品系(PER-4和 PER-5)，隨后利用這兩個(gè)作為親本與帶有彩色種皮的花生材料雜交，F(xiàn)2外種皮世代(F3 胚世代)以3白：1粉紅或紅色的比例分離，認(rèn)為這種白色種皮來源是由單基因控制的，在所研究的品系中，白色種皮性狀顯性于粉紅色和紅色。

以上研究為花生白種皮基因型的鑒定及分子育種奠定了基礎(chǔ)，由于之前開發(fā)的標(biāo)記與白色種皮顏色性狀連鎖性不高等原因，造成這些標(biāo)記難以準(zhǔn)確便捷的應(yīng)用到花生遺傳和分子育種研究中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與花生白種皮緊密連鎖的分子標(biāo)記AhyWptc及其應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，該分子標(biāo)記能夠通過基因型的鑒定，提前一代鑒定白色種皮花生。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

本發(fā)明提供一種與花生白種皮緊密連鎖的分子標(biāo)記AhyWptc，所述分子標(biāo)記AhyWptc的特異性引物對為SEQ ID NO：1所示的正向引物和SEQ ID NO：2所示的反向引物。

本發(fā)明還提供一種利用上述分子標(biāo)記AhyWptc鑒定白種皮花生的方法，包括以下步驟：

(1)提取花生子葉組織DNA；

(2)采用所述的特異性引物對對步驟(1)提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(3)對步驟(2)得到的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，若出現(xiàn)210bp大小的特征條帶，則判定待測花生材料下代種子為白種皮。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，擴(kuò)增體系為：DNA模板1μL，正向引物和反向引物各 1μL，2×NG PCR MasterMix 10μL，加水至20μL。