[發明專利]一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙條及其應用

在審

• 申請號: 202210268689.0
• 申請日: 2022-03-18
• 公開（公告）號: CN114518449A
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 凌素美;董明科;汪世華;王榮智;賈坤志;徐楊;徐愛迪;聶宇姣
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/53;C07K16/44;C12N5/20
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 彭琴;蔡學俊

本發明提供一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙，屬于重金屬快速檢測領域。所述乳膠微球免疫層析試紙條包括以下組分：塑料外殼、樣品墊、免疫探針結合墊、硝酸纖維膜和吸水墊；所述免疫探針結合墊滴加有抗汞離子單克隆抗體標記的乳膠微球免疫探針；所述抗汞離子單克隆抗體是抗Hg²⁺?ITCBE半抗原鼠源雜交瘤細胞株7A1分泌的單克隆抗體，鼠源雜交瘤細胞株7A1，保藏號為CGMCC No.23879。該乳膠微球免疫層析試紙條，其檢測閾值為100 ng/mL，檢測限為0.78 ng/mL，其特異性強，靈敏度高，重復性良好，性能穩定，操作要求低，非常適用于糧食中快速檢測，對監測重金屬汞的殘留具有重要意義。

技術領域

本發明屬于重金屬污染快速檢測領域，涉及一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙條及其應用。

背景技術

汞（Hg）又名水銀，密度為13.49 g/cm³，標準狀況下汞的熔點和沸點分別為-38.87℃和 356.6 ℃。由于其熔沸點低，再加上易揮發等特點，導致其遷移性和活動性較強。環境中汞污染的來源主要有：自然來源、大氣沉降、垃圾焚燒、采礦活動等等。此外，涉汞產品如水泥、農藥、電燈、溫度計、牙科材料等在生產過程中會產生含汞廢棄物，當它們被廢棄后，其焚燒或填埋又會造成二次污染，也不可避免的增加了自然界總汞量。自然界中，汞通常以以下三種形態分布：氣相形式的元素汞（Hg0）、微粒汞（Hgp）以及氧化氣相汞（Hg²⁺）。其中，化合態甲基汞毒性最強其具有神經毒性、心血管毒性、腎臟毒性、生殖毒性、免疫系統效應和致癌性等。無機汞次之，游離汞在自然界很少存在，雖毒性相對較低，但長期接觸會引起慢性中毒。這些重金屬污染均會在食物鏈的生物放大作用下成千上百倍富集，最終進入人體器官累積，對人體健康構成巨大威脅。植物具有吸收、積累汞的能力，并隨水土中含汞量增加而吸收積累更多的汞，植物中汞又可被當做動物飼料，循環進入動物體內。目前，用于汞測定的常用分析方法主要有氫化物發生原子熒光光譜法（HG-AFS)、冷蒸氣原子吸收光譜法（CVAAS)、電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS)、免疫層析法以及原子吸收光譜法（AFS）等。這些傳統的實驗室檢測方法雖然具有較高的分析靈敏度和技術成熟度，但是通常需要復雜的樣品前處理，耗時費力且成本高昂，無法滿足實際樣品中汞含量簡單、快速的現場需求。因此，重金屬汞的現場快速檢測技術是近年來相關領域研究的熱點。本發明利用活化后的乳膠微球微粒來偶聯抗體制備免疫檢測的探針。由于乳膠微球粒徑大（200 nm），比其他市面上應用廣泛的納米微粒要大，故表面積大所以能結合偶聯更多的抗體，利用這一微粒與生俱來的優勢，結合免疫層析試紙條技術，研發出乳膠微球免疫層系試紙條，該免疫層系試紙條組裝簡單，特異性強，只針對Hg²⁺-ITCBE有競爭，對其他金屬離子無交叉反應，穩定性良好，靈敏度高，重復性極好，檢測限低于國家食品安全標準，能有效準確地檢出糧食中殘留的重金屬汞離子，這對糧食中重金屬殘留的安全監測具有中重要的現實意義。

發明內容

本發明針對上述問題，提供一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙條及其應用。本發明制備的乳膠微球免疫層析試紙條組裝簡單，特異性強，靈敏度高，穩定性好，可用于糧食中汞離子的快速檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙條，所述乳膠微球免疫層析試紙條包括以下組分：塑料外殼、樣品墊、免疫探針結合墊、硝酸纖維膜和吸水墊；所述免疫探針結合墊滴加有抗汞離子單克隆抗體標記的乳膠微球免疫探針；所述抗汞離子單克隆抗體是抗Hg²⁺-ITCBE半抗原鼠源雜交瘤細胞株7A1分泌的單克隆抗體，鼠源雜交瘤細胞株7A1，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號；保藏日期為2021年11月23日，保藏號為CGMCC No. 23879。

上述一種檢測重金屬汞離子的乳膠微球免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

（1）抗汞離子單克隆抗體標記的乳膠微球免疫探針的制備：