[發明專利]一種檢測鈣骨素的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210257686.7
• 申請日: 2022-03-16
• 公開（公告）號: CN114460309A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 趙科
• 申請（專利權）人: 北京豪邁生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/537;G01N21/76
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 相黎超

本發明公開了一種檢測鈣骨素的試劑盒及檢測方法，屬于免疫檢測的技術領域，解決了相關檢測方法用時長的問題。本發明試劑盒包括校準品、生理鹽水、R1試劑、R2試劑和R3試劑；所述R1試劑包括磁分離試劑和抗紅細胞抗體；R2試劑包括HRP標記的BGP單抗；R3試劑包括Acridan標記的BGP單抗；測步驟包括：S1、于人全血中加生理鹽水和R1試劑，反應、磁分離后得反應液A；S2、于反應液A中加R2試劑和R3試劑，孵育后得反應液B；S3、于反應液B中加入激發液隔離液，測定；S4、繪制標準曲線，確定BGP含量。本發明試劑盒和方法用于檢測人全血中的BGP含量，其具有檢測高效、用時少的優點。

技術領域

本發明涉及免疫檢測的技術領域，更具體地說，它涉及一種檢測鈣骨素的試劑盒及檢測方法。

背景技術

骨鈣素主要是由成骨細胞成牙質細胞合成并分泌的，屬于γ-羧谷氨酸包含蛋白類。骨鈣素中谷氨酸基經γ-羧基化后才具有生物學效應，而其中的羧基化必須有維生素K參與，因此也是維生素K依賴性蛋白質。骨鈣素又稱骨γ-羧谷氨酸包含蛋白(bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins，BGP)，該蛋白質在骨礦化峰期之后才出現積聚。BGP的基因首先翻譯成一個88個氨基酸殘基的骨鈣素原，骨鈣素原移走信號肽后，γ-羧基化識別位點與依賴維生素K的羧化酶結合發生羧化反應，進而使得骨鈣素中的谷氨酸基從無活性的谷氨酸殘基轉化為有活性的γ-羧基谷氨酸，此后前肽移走，完成骨礦化。

BGP是骨轉化的特異標志物，成骨細胞分泌的BGP大量沉積在骨質中，而約20％的BGP進入血液循環，因此通過血清骨鈣素可以了解成骨細胞，特別是新形成的成骨細胞的活動狀態。骨鈣素值隨年齡的變化以及骨更新率的變化而不同：骨更新率越快，骨鈣素值越高，反之降低。因此可以通過檢測血清中骨鈣素的水平來了解骨更新的變化。

目前，針對血清中骨鈣素的含量測定，其檢測對象為血清，因此在進行檢測的第一步就是獲得血清。臨床上檢測血清中BGP含量的常見方法有放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)和磁微粒化學發光法。其中，放射免疫法在檢測過程中存在放射性污染，而酶聯免疫吸附法存在檢測時間長、操作復雜、重復性差、不適于急診和臨床病人及時診斷的需要。

而采用其中的磁微粒化學發光法進行血清中BGP含量檢測時，是將做了熒光標記的BGP單抗負載于磁微粒上，而BGP單抗和待檢測血清中的BGP特異性結合后，將負載有BGP單抗、BGP和熒光標記物的磁微粒拿去做熒光檢測，以實現最終的檢測血清中BGP含量的目的。該方法雖然也在一定程度上提高了BGP含量檢測的靈敏度和準確性，使得該方法的最低檢測限為0.5-1ng/mL，但是同時也還是存在檢測時間過長(檢測時間為35-40min左右)的問題，從而不適用于臨床快速檢測的應用。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本申請第一個目的在于提供一種檢測鈣骨素的試劑盒，本申請的第二個目的在于提供一種檢測鈣骨素的試劑盒的檢測方法。采用本申請的試劑盒進行人全血樣本中BGP的檢測時，以磁分離技術替代傳統的離心操作，以將人全血樣本中的紅細胞去除，縮短了每個樣本的檢測時間；同時本申請的檢測方法是純液相反應，具有快速檢測人血中BGP的含量且檢測靈敏度高的優點。

為實現上述第一個目的，本發明提供了如下技術方案：一種檢測鈣骨素的試劑盒，包括校準品、生理鹽水、R1試劑、R2試劑以及R3試劑；其中，所述R1試劑包括能夠與人全血中的紅細胞特異性結合的抗紅細胞抗體以及能夠結合抗紅細胞抗體的磁分離試劑；所述R2試劑包括HRP標記的BGP單抗的溶液；所述R3試劑包括Acridan標記的BGP單抗的溶液；所述校準品包括包括濃度為0ng/mL、2.5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、150ng/mL的骨鈣素抗原溶液。