[發明專利]一種快速檢測牛結核病的方法

在審

• 申請號: 202210254251.7
• 申請日: 2022-03-15
• 公開（公告）號: CN114657271A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 樊曉旭;張浩博;劉婷婷;亓菲;孫翔翔;劉蒙達;田莉莉;孫明軍;董雅琴;焉鑫;付樹芳;孫世雄;遲慶安;馮淑芳;仵國政;張培培;魏潤宇;王毓秀;邵衛星;孫淑芳;范偉興
• 申請（專利權）人: 中國動物衛生與流行病學中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 北京識然知識產權代理事務所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發明公開了一種通用快速檢測牛結核病的引物、探針及檢測方法，其中引物和探針適用于RAA熒光法檢測，可實現在39℃條件下20分鐘內完成動物布魯氏菌核酸的檢測；與豬鏈球菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌、大腸桿菌、布魯氏菌核酸樣本無交叉反應，特異性達100％；檢測方法快速、容易實現高通量，同時降低了檢測時間和檢測成本，本發明提供的基于RAA熒光法通用快速檢測牛結核病病原的方法，靈敏度高，反應檢測靈敏度在95％的概率下達到66copies/反應。

技術領域

本發明屬于細菌分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種對牛結核病病原的快速檢測方法。

背景技術

牛結核病(Bovine Tuberculosis，bTB)是由牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis，M.bovis)等引起的一種人獸共患的慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病。以組織器官的結核結節性肉芽腫和干酪樣、鈣化的壞死病灶為特征。世界動物衛生組織(OIE)將其列為必須通報的動物疫病(notifiable diseases)。2012年，我國發布《國家中長期動物疫病防治規劃(2012—2020年)》，將牛結核病列為16種優先防治動物疫病病種。《國家奶牛結核病防治指導意見(2017-2020年)》進一步提出了牛結核病的控制目標。據估計，全世界有超過5000萬頭牛感染，每年耗費30億美元。人通過食用未經消毒的牛奶或與患病動物接觸，感染牛結核病。

牛結核病通常呈慢性經過，潛伏期在半月至數年不等。大多數情況下，細菌以休眠狀態潛伏在動物體內，不引起任何臨床癥狀，表現為潛伏感染。有的動物在感染幾個月甚至數年后，才出現明顯的臨床癥狀，發展為活動性結核。牛結核病病原菌會侵染易感動物幾乎所有的組織器官，因患病器官不同，表現出來的臨床癥狀亦不同。整體上，患病動物表現出明顯的食欲不振，頑固性腹瀉，漸進性消瘦，易疲勞，偶爾出現波浪熱，間歇性咳嗽，部分個體伴隨淋巴結腫大。全國牛結核病專項調查顯示，其感染率波動上升趨勢，屠宰環節的檢出率更高。奶牛結核病高感染率嚴重威脅奶業安全和公共衛生安全，其控制凈化工作任務非常艱巨。受制于檢測技術的瓶頸，我國牛結核病檢測的需求，特別是在現場快速檢測的需求缺口越來越大。因此，加強牛結核病檢測技術研究，為疫病的控制、凈化，動物健康，公共衛生安全具有重要意義。

目前對牛結核病的診斷方法有如下的幾種：

1)臨床診斷

牛結核病以肺結核最為常見，其次是乳房結核和腸結核，以及淋巴結核、胸膜結核和腹膜結核，有時可見肝、脾、腎、生殖器官、腦、骨和關節結核，嚴重者可表現為全身性粟粒性結核。根據感染累及器官不同，通常可見呼吸癥狀、腹瀉、泌乳減少、生殖性能紊亂、神經癥狀等。

2)實驗室診斷