[發(fā)明專(zhuān)利]一種聯(lián)合檢測(cè)谷胱甘肽和ATP的熒光生物傳感器

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210241163.3
• 申請(qǐng)日: 2022-03-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114609106A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃加棟;姚玉穎;王玉;劉素;郭志強(qiáng);朱志學(xué);李靜靜;張清心;徐婉晴;李宗強(qiáng);朱鏡儒;李倩茹
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64;C12Q1/00
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 牛芳

1.一種聯(lián)合檢測(cè)谷胱甘肽和ATP的熒光生物傳感器，其特征在于，包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO: 1-4所示的連接探針L、掛鎖探針M、ATP block鏈、報(bào)告探針S和Mg²⁺、phi29 DNA聚合酶、T4 DNA連接酶、dNTP；

所述的掛鎖探針M的5’端磷酸化處理；

所述ATP block鏈第8位、第9位修飾二硫鍵，3’端修飾Inverted dT；

所述報(bào)告探針S第13位、第14位為核糖核苷酸；第13位前修飾熒光淬滅基團(tuán)，第14位后修飾熒光報(bào)告基團(tuán)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物傳感器，其特征在于，所述連接探針L、掛鎖探針M和T4 DNA連接酶以環(huán)狀模板代替；

所述環(huán)狀模板的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

將掛鎖探針M與連接探針L在T4 DNA連接酶緩沖液中雜交，然后加入T4 DNA連接酶低溫下反應(yīng)，然后滅活T4 DNA連接酶；純化后得環(huán)形模板。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物傳感器，其特征在于，所述熒光生物傳感器還包括緩沖溶液；所述緩沖溶液中包含Mg²⁺。

4.一種包含如權(quán)利要求1-3任一所述熒光生物傳感器的檢測(cè)谷胱甘肽和ATP的試劑盒。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括谷胱甘肽和ATP的標(biāo)準(zhǔn)樣品。

6.一種采用如權(quán)利要求1-3任一所述熒光生物傳感器或者如權(quán)利要求4或5所述試劑盒檢測(cè)谷胱甘肽和ATP的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）連接探針L和掛鎖探針M在T4 DNA連接酶的催化下獲得環(huán)狀模板；

（2）環(huán)狀模板、Mg²⁺、phi29 DNA聚合酶、dNTP、ATP block鏈、報(bào)告探針S在緩沖液中30℃孵育；然后滅活phi29 DNA聚合酶；

（3）將待測(cè)樣品或谷胱甘肽或ATP的標(biāo)準(zhǔn)樣品的系列濃度溶液加入步驟（2）的體系中，37℃下孵育，然后進(jìn)行熒光檢測(cè)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，還包括制作谷胱甘肽或ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算待測(cè)樣品中目標(biāo)物濃度的步驟。