[發明專利]一種基于雙滾環分離檢測外泌體的光學生物傳感器

在審

• 申請號: 202210241161.4
• 申請日: 2022-03-11
• 公開（公告）號: CN114609104A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 王玉;朱鏡儒;黃加棟;劉素;郭志強;李倩茹;姚玉穎;李宗強;李靜靜;張清心;徐婉晴;朱志學
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12Q1/68
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 牛芳

1.一種基于雙滾環分離檢測外泌體的生物傳感器，其特征在于，包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO: 1-10所示的模板CT1，模板CT2，Connector，DNA-chol，CP1，CP2，發夾探針H1，發夾探針H2，Reporter，crRNA，和Cas12a、T4 DNA連接酶；

所述DNA-chol的3’端修飾膽固醇；

所述Reporter的5’端和3’端分別連接熒光報告基團和熒光猝滅基團。

2.根據權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述滾環模板CT1、滾環模板CT2和T4 DNA連接酶用RCA1和RCA2代替，所述RCA1和RCA2的序列如SEQ ID NO: 12-13所示。

3.一種包含如權利要求1或2所述的生物傳感器的試劑盒。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括緩沖溶液。

5.一種如權利要求1或2所述生物傳感器或如權利要求3或4所述試劑盒檢測外泌體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將滾環模板CT1和滾環模板CT2分別與primer混合在T4 DNA連接酶催化下制備滾環1和滾環2；

（2）將滾環1或滾環2在phi29聚合酶催化下以dNTP為底物制備RCA1或RCA2；

（3）將RCA1、RCA2、待測樣品或外泌體標準品、DNA-chol、Connector混合，調節pH至6.0；然后加入發夾探針H1、發夾探針H2、Cas12a、crRNA和Reporter，混合均勻后孵育，檢測熒光。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述primer的序列如SEQ ID NO: 11所示。