[發明專利]一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202210238452.8
• 申請日: 2022-03-10
• 公開（公告）號: CN114563504B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 彭軍;劉超;宋愛民;謝沙莎
• 申請（專利權）人: 合肥歆智醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 安徽知問律師事務所 34134
• 代理人: 劉靜洋

本發明屬于激素檢測技術領域，涉及一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法及試劑盒。針對現有高效液相色譜串聯質譜技術檢測血漿中醛固酮時，所需樣品量大(≥500μL)，特異性不足，檢出限難以突破導致的血漿中游離醛固酮檢測領域處于空白的技術問題，本申請提供一種測定血漿中游離醛固酮含量的試劑盒，僅需300μL血漿即可對血漿中游離醛固酮進行檢測。本申請還提供了一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法，依次使用超濾法分離，液液萃取法提取，再通過高效液相色譜串聯質譜檢測，可使定量下限達到0.05pg/mL，測試結果的準確度和精密度較好，操作快速簡便。

技術領域

本發明屬于激素檢測技術領域，具體地，涉及一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法及試劑盒。

背景技術

醛固酮是最重要的鹽皮質激素類固醇激素，在維持血管內體積和電解質平衡方面發揮重要作用。最近的研究發現醛固酮在其他方面也有著不容忽視的調節作用，如在上皮鈉通道的表達、炎癥、代謝綜合征和高血壓、胰島素抵抗、心血管和腎纖維化等疾病。醛固酮的測定可用于心血管疾病、肝硬化、腎臟疾病(腎上腺偶發瘤、腎上腺癌、艾迪生病、先天性腎上腺增生、腎動脈狹窄和腎小管通道病等)、胰島素抵抗和糖尿病等疾病的調查。醛固酮的準確測定對于原發性醛固酮增多癥的篩查、診斷和亞型分類至關重要。原發性醛固酮增多癥是一種嚴重且經常被漏診的繼發性高血壓，主要由產生醛固酮的腺瘤或由雙側腎上腺增生引起的特發性醛固酮增多癥引起，原發性醛固酮增多癥患病率在3～32％之間，并且醛固酮分泌過高伴隨著嚴重的心、腦等靶器官損傷，因此，原發性醛固酮增多癥的早期識別至關重要，這依賴于醛固酮的準確測定。

血漿類固醇測定是腎上腺疾病臨床評估的主要工具之一，血漿中游離醛固酮的含量很低，濃度在pmol/L級別，因此需要高靈敏的醛固酮測定方法。傳統上，醛固酮的測定方法主要為放射免疫測定法和自動化化學發光免疫測定法，前處理方法較為簡單但方法特異性不足，因為免疫測定容易受到交叉反應物(如其他類固醇激素及結構類似物)或其他干擾物質的干擾，容易造成檢測結果的假陽性或假陰性，準確度和精密度較差，同時存在醛固酮競爭性免疫測定之間的方法依賴性偏差問題而導致不同免疫法的測定結果無法直接對比等問題，不利于臨床實驗的長期追蹤以及相互比對。

目前關于體內測定游離醛固酮的文獻報道較少，通常測定總醛固酮，一般采用氣相色譜-質譜法或液相色譜-串聯質譜法，其中氣相色譜-質譜法方法在分析之前需要經過費時費力的衍生化前處理步驟。中國專利申請公布號CN113049697A，發明名稱為“同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法及試劑盒”，公開了的方法包括樣品前處理步驟和進樣檢測步驟，其中，樣品前處理包括如下步驟：向血液樣本中加入孵育緩沖液，孵育設定時間后，加入pH值調節劑，凈化后，得處理液，將處理液氮氣吹干，后采用流動相復溶，得待測液；所述pH值調節劑為甲酸、氨水或乙酸銨；采用液相色譜串聯質譜方法進行檢測。該方案優化前處理過程，采用10～100mM的乙酸銨為pH值調節劑，降低其在待測溶液中的質子化解離，提高其在SPE處理中的回收率，提高了物質的檢測靈敏度，但依然僅能對總醛固酮進行檢測。

游離醛固酮更能代表體內具有生物活性醛固酮水平，醛固酮由腎上腺上皮細胞分泌，主要以蛋白結合態醛固酮和游離態醛固酮存在于血漿中，其中血漿游離態醛固酮的比例在25～40％之間，因此，要求分析方法的靈敏度極高。

發明內容

1、要解決的問題

針對現有高效液相色譜串聯質譜技術檢測血漿中醛固酮時，所需樣品量大(≥500μL)，特異性不足，檢出限難以突破導致的血漿中游離醛固酮檢測領域處于空白的技術問題，本申請提供一種測定血漿中游離醛固酮含量的試劑盒，僅需300μL血漿即可對血漿中游離醛固酮進行檢測。本申請還提供了一種檢測血漿中游離醛固酮含量的方法，依次使用超濾法分離，液液萃取法提取，再通過高效液相色譜串聯質譜檢測，可使定量下限達到0.05pg/mL，測試結果的準確度和精密度較好，操作快速簡便。

2、技術方案

為達到上述目的，提供的技術方案為：