[發明專利]一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202210238452.8
• 申請日: 2022-03-10
• 公開（公告）號: CN114563504B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 彭軍;劉超;宋愛民;謝沙莎
• 申請（專利權）人: 合肥歆智醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 安徽知問律師事務所 34134
• 代理人: 劉靜洋

1.一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法，其特征在于：使用試劑盒，包括以下步驟：

分別將校準曲線工作液和質控品工作液加入空白基質中，制備校準曲線樣品和質控品樣品；

分別將血漿樣品、校準曲線樣品和質控品樣品超濾后，經液液萃取的步驟，制備上清液；

取上清液氮吹，用100 μL的30~50%甲醇水溶液復溶后，進行LC-MS/MS測定，得到游離醛固酮的含量；

所述LC-MS/MS：Waters Acquity 超高效液相色譜系統和Waters Xevo TQS串聯質譜；色譜柱：ACQUITY UPLC? BEH C18，2.1×50 mm 1.7 μm；

所述超濾條件為分別在300~900 μL緩沖液中加入300 μL血漿樣品、校準曲線樣品或質控品樣品，于37℃，2000 g離心1小時；

所述萃取參數為取500 μL超濾后的溶液加入30 μL內標和800 μL萃取劑 ，渦旋3 min，于4℃，12000 g離心2 min；

液相色譜條件為：進樣器溫度：4~15℃；柱溫：40~50℃；洗脫梯度如下：

所述流動相A：0.5 mM氟化銨水溶液；

所述流動相B：甲醇溶液；

所述試劑盒包括以下組分：校準曲線溶液；質控品溶液；內標準品溶液；替代基質；活化劑；緩沖液；萃取劑；流動相；

所述萃取劑為甲基叔丁基醚；

所述緩沖液為4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液；

質譜條件為：多反應監測參數如下：

掃描模式：多反應離子監測；電離模式：負離子模式；電噴霧毛細管電壓：-2.5 kV；錐孔氣流速：150 L/Hr；錐孔電壓：30 V；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣流速：800 L/Hr；脫溶劑溫度：550℃。

2.根據權利要求1所述的一種測定血漿中游離醛固酮含量的方法，其特征在于：所述校準曲線溶液和質控品溶液均為醛固酮溶于替代基質中；所述校準曲線工作液的濃度為0.2~5000 pg/mL；所述質控品工作液的濃度范圍為5~200 ng/mL；所述內標準品溶液為氘代醛固酮溶于替代基質中，濃度為1 ng/mL；所述替代基質為純水、甲醇或乙腈中的一種或幾種。