[發明專利]紋狀體類腦器官及其培養基、培養方法和應用

在審

• 申請號: 202210238261.1
• 申請日: 2022-03-11
• 公開（公告）號: CN114457015A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 王濤;吳孟華
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/071;C12N5/0735;C12Q1/02
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 顧書玲;萬志香

1.一種誘導紋狀體類腦器官產生的培養基，其特征在于，所述培養基為添加有SHH因子的PM培養液，優選所述SHH因子的濃度為200±50ng/ml。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述SHH因子在所述PM培養液中的濃度為200±5ng/ml，優選為200±1ng/ml，更優選為200ng/ml。

3.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述PM培養液為含有以下濃度的成分1±0.1％(v/v)N2添加劑,2±0.2％(v/v)B27無維生素A，0.15±0.02％(w/v)葡萄糖及100±5uMβ-巰基乙醇的DMEM/F12培養基。

4.一種紋狀體類腦器官的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.使用細胞消化液Accutase孵育人胚胎干細胞后，將hESC解離成單細胞懸液，在神經誘導培養基NIM中進行培養，每隔45-52小時更換新的神經誘導培養基NIM；

S2.在培養10±0.5天時，將細胞轉移到低吸附的孔板中，換成上述誘導紋狀體類腦器官產生的培養基中進行培養；每隔45-52小時更換新的述誘導紋狀體類腦器官產生的培養基，直到分化第18±0.5天；

S3.然后將細胞更換到新的DM培養液中進行培養，即得所述紋狀體類腦器官。

5.根據權利要求4所述的紋狀體類腦器官的培養方法，其特征在于，所述DM培養液中添加有以下終濃度的生長因子：20±1ng/ml腦源性神經營養因子，20±1ng/ml膠質細胞源性神經營養因子及200±10μM抗壞血酸維生素C。

6.根據權利要求4或5所述的紋狀體類腦器官的培養方法，其特征在于，所述DM培養液的成分包括DMEM/F12與Neurobasal的體積比為1，0.5±0.01％N2,1±0.1％B27,1±0.1％GlutaMAX,0.5±0.01％(v/v)MEM-NEAA,50±5μMβ-巰基乙醇，0.025±0.001％(v/v)胰島素。

7.根據權利要求4或5所述的紋狀體類腦器官的培養方法，其特征在于，所述NIM培養基，按照終濃度組成包括：DMEM/F12與Neurobasal的體積比為1，1±0.1％N2，2±0.1％B27，1±0.1％GlutaMAX，100±2nM LDN-193189，10±1μMSB-431542，2±0.1μM XAV-939及50±0.5μM Y27632。

8.根據權利要求4或5所述的紋狀體類腦器官的培養方法，其特征在于，S1步驟中，以每孔4～8x10⁴個細胞的密度鋪于低吸附圓底的孔板進行培養。

9.根據權利要求4-8任一項所述培養方法獲得的紋狀體類腦器官。

10.權利要求9所述述紋狀體類腦器官在篩選藥物、疾病研究或細胞研究上的用途。