[發明專利]一種產順-11-十六碳烯醛破囊壺菌菌株的培育方法

在審

• 申請號: 202210226077.5
• 申請日: 2022-03-08
• 公開（公告）號: CN114672422A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 胡永紅;楊晶晶;崔子龍;趙芷若;郭宏康;葉競靈;王志;汪婷
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/24;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種產順-11-十六碳烯醛破囊壺菌菌株的培育方法，其具體步驟如下：

(1)取破囊壺菌于活化培養基中得活化菌液，將活化后的菌液離心，去除上清液，用無菌生理鹽水將菌體懸浮，獲得細胞濃度在10⁷～10⁹CFU/mL的菌懸液；

(2)在無菌條件下，取步驟(1)獲得的菌懸液均勻平鋪在固體培養皿中，平鋪量為1.5～2mL/cm²，進行氮離子注入誘變，注入能量為20～40keV，氮離子注入量為5～50×10¹⁴ions/cm²；

(3)將步驟(2)中經過氮離子注入誘變的菌液用無菌生理鹽水稀釋體積50～150倍，取稀釋后的菌液均勻涂布在M4培養基上，涂布的量為50～100μL/cm²，放入培養箱中培養；

(4)于M4平板上挑選出單菌落作為初篩菌；

(5)將步驟(4)中獲得的初篩菌進行發酵培養，得到能穩定產順-11-十六碳烯醛的破囊壺菌菌株。

2.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于步驟(1)中所述的活化培養基的成分為：葡萄糖50～55g/L、無水乙醇5～8g/L，酵母提取物2～3g/L、K₂HPO₄0.2～0.3g/L，人工海鹽13～14g/L、蛋白胨0.1～0.2g/L。

3.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于步驟(1)中活化培養條件為：在溫度28～30℃，轉速160～180rpm，pH為6.5～7.5條件下培養3～6天。

4.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于步驟(3)中放入培養箱中培養條件為15～30℃中恒溫培養24～48h。

5.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于步驟(3)中M4培養基成分為：葡萄糖20～22g/L，蛋白胨1.5～2g/L，酵母提取物1.0～2.0g/L，人工海鹽33～36g/L，瓊脂粉20～25g/L。

6.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于步驟(5)中發酵培養條件為：溫度為15～30℃、轉速為200～250r/min，培養時間為4～6天。