[發(fā)明專利]一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210220177.7
• 申請(qǐng)日: 2022-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114544295A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊雨勝;張薇;周歡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢原谷生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 武漢天領(lǐng)眾智專利代理事務(wù)所(普通合伙) 42300
• 代理人: 劉誠(chéng)

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法，涉及IgM類校準(zhǔn)品領(lǐng)域，步驟一：羊多抗的獲取：按固定免疫程序免疫羊，當(dāng)效價(jià)合格后，提取血清；步驟二：羊多抗的純化：使用親和層析法純化提取到的羊多抗血清；步驟三：羊多抗的切割：使用酶對(duì)羊多抗IgG進(jìn)行切割，純化羊多抗中的Fab片段，并將純化后的Fab片段用于后續(xù)偶聯(lián)；步驟四：人IgM與Fab片段的偶聯(lián)：使用化學(xué)方法將人IgM與羊多抗的Fab片段進(jìn)行偶聯(lián)；步驟五：檢測(cè)：將人IgM與羊多抗的Fab片段進(jìn)行偶聯(lián)后的產(chǎn)物進(jìn)行親和性測(cè)試以及老化試驗(yàn)測(cè)試；制備好的特異性IgM按照一定濃度添加至陰性血清中，即可得到此類IgM抗體血清，可以用于體外診斷IgM類試劑盒的研發(fā)及特異性IgM類血清的校準(zhǔn)品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及IgM類校準(zhǔn)品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法。

背景技術(shù)

IgM主要存在于生物體內(nèi)血液中，對(duì)防止菌血癥起主要作用。IgM類抗體的測(cè)定，對(duì)某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價(jià)值。

IgM抗體它是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體，一經(jīng)感染快速產(chǎn)生，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，IgM抗體量逐漸減少而消失。它們?cè)谂c抗原結(jié)合后啟動(dòng)補(bǔ)體的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。它們還把入侵者相互連接起來(lái)，聚成一堆以便于巨噬細(xì)胞的吞噬。母體中的IgM不能通過(guò)胎盤(pán)，如果胎兒或新生兒的血液中發(fā)現(xiàn)有IgM，說(shuō)明已發(fā)生過(guò)宮內(nèi)感染。

IgM占血清免疫球蛋白總量的5％～10％，血清濃度約1mg/ml。單體IgM以膜結(jié)合型表達(dá)于B細(xì)胞表面，構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體。IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是機(jī)體抗感染的先頭部隊(duì)，血清中檢出IgM，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。

特異性IgM抗體一般是在發(fā)病第二天至第四天內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)，最早時(shí)即可在第一天測(cè)到，后續(xù)會(huì)在第七天至第十五天達(dá)到高峰，之后會(huì)逐漸減少至消失。一般認(rèn)為，隱性感染時(shí)特異性IgM抗體、IgG抗體均會(huì)升高；再感染時(shí)只會(huì)出現(xiàn)特異性IgG抗體，無(wú)癥狀表現(xiàn)；部分接種疫苗后再感染的病人，特異性IgM抗體，IgG抗體均會(huì)升高。對(duì)于一些慢性感染性疾病，特異性IgM抗體的長(zhǎng)期存在可能意味著持續(xù)感染。對(duì)于疫苗接種者而言，特異性IgM抗體的出現(xiàn)可能意味著有效接種。

IgM抗體在診斷中具有重要的意義。對(duì)于研發(fā)工作者，但是由于其僅在感染初期出現(xiàn)，故此類樣本的獲取難度較大，樣本量較少；

同時(shí)據(jù)報(bào)道，IgM抗體血清在凍融2次或者-25℃存放2至8周，基本可使大量IgM弱陽(yáng)性的標(biāo)本轉(zhuǎn)為陰性。存放太久可能會(huì)出現(xiàn)非特異性吸附，血清在低稀釋度使用時(shí)可能出現(xiàn)假性結(jié)果，因此需要一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一種用于制備IgM類校準(zhǔn)品的方法，包括以下步驟：

步驟一：羊多抗的獲取：按固定免疫程序免疫羊，當(dāng)效價(jià)合格后，提取血清；

步驟二：羊多抗的純化：使用親和層析法純化提取到的羊多抗；

步驟三：羊多抗的切割：使用酶對(duì)羊多抗IgG進(jìn)行切割，純化羊多抗中的Fab片段，并將純化后的Fab片段用于后續(xù)偶聯(lián)；

步驟四：人IgM與Fab片段的偶聯(lián)：使用化學(xué)方法將人IgM與羊多抗的Fab片段進(jìn)行偶聯(lián)；

步驟五：檢測(cè)：將人IgM與羊多抗的Fab片段進(jìn)行偶聯(lián)后的產(chǎn)物進(jìn)行親和性測(cè)試以及老化試驗(yàn)測(cè)試；

步驟六：再調(diào)整：根據(jù)步驟五中檢測(cè)的結(jié)果對(duì)人IgM與羊多抗的Fab片段進(jìn)行偶聯(lián)的位置以及操作方法進(jìn)行調(diào)整。