[發(fā)明專利]一種IGF-1檢測(cè)試劑盒及其制備方法和檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210218307.3
• 申請(qǐng)日: 2022-03-04
• 公開（公告）號(hào): CN114544978A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒繼華;張華杰;賈江花;李富勇;王芬;李倩靚;張明宇;潘碧瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/543;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 胡天人

本發(fā)明公開了一種IGF?1檢測(cè)試劑盒及其制備方法和檢測(cè)方法，所述IGF?1檢測(cè)試劑盒包括釋放劑、置換劑、固相試劑、發(fā)光試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，所述固相試劑為IGF?1抗體包被的磁微粒混懸液，磁微粒濃度為0.1～0.8mg/ml，包被抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。本發(fā)明提供了一種靈敏度高、檢測(cè)效率高、方便使用的用于臨床檢測(cè)IGF?1的試劑盒，可用于進(jìn)行生長(zhǎng)激素(GH)的缺乏和過(guò)量的輔助診斷，本發(fā)明試劑盒操作簡(jiǎn)單方便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)范圍寬。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)、免疫、體外診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及IGF-1檢測(cè)試劑盒及其制備方法和檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)是一種分子量約為7.5kDa的單鏈多肽，它是由70個(gè)氨基酸殘基組成的，在各組織中普遍表達(dá)，但主要由肝臟合成和分泌，并通過(guò)生長(zhǎng)激素調(diào)節(jié)。血液循環(huán)中主要以與胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3(IGFBP-3)和酸性不穩(wěn)定亞基(ALS)相結(jié)合形成的三元復(fù)合物形式存在。臨床上，IGF-1是一種可以用于篩查生長(zhǎng)激素缺乏癥(GHD)的標(biāo)記物。在體內(nèi)，生長(zhǎng)激素(GH)會(huì)刺激IGF-1的合成，但由于生長(zhǎng)激素(GH)的半衰期較短且濃度水平容易受一些外部因素(例如運(yùn)動(dòng)，壓力，睡眠，短期禁食等)的影響從而有較大波動(dòng)，相較之下，IGF-1能更有效地反映生長(zhǎng)激素的真實(shí)水平。因此，IGF-1被廣泛應(yīng)用于生長(zhǎng)激素的缺乏和過(guò)量的診斷上。

IGF-1的生成受多種因素如年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀況和生長(zhǎng)激素的釋放等因素影響，出生時(shí)其濃度低，在兒童和青春期逐漸增長(zhǎng)，其后隨年齡的增長(zhǎng)而下降。在一些患侏儒癥、生長(zhǎng)激素缺乏癥、矮小癥等的兒童中，因其腦垂體、甲狀腺等分泌激素不同，以及其它多方面因素影響，導(dǎo)致其血清IGF-1和IGFBP-3的含量明顯減少。IGF與IGF結(jié)合蛋白(IGFBP)結(jié)合以蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式在血清中循環(huán)，而只有不到1％的IGF以自由、非關(guān)聯(lián)的形式流通。與IGFBPs的結(jié)合增加了IGFs在血液中的半衰期，而游離IGF的生理作用尚未確定。

目前IGF-1及IGFBP-3檢測(cè)已為兒童生長(zhǎng)發(fā)育落后的早期干預(yù)與治療提供了更多的理論依據(jù)和參考。在我國(guó)《矮身材兒童診療指南》中推薦有條件的醫(yī)院要常規(guī)對(duì)這兩種激素進(jìn)行檢測(cè)。生長(zhǎng)激素在人體內(nèi)一方面直接作用于骨骼促進(jìn)骨骼的生長(zhǎng)，促進(jìn)人體長(zhǎng)高；另一方面作用于肝臟生長(zhǎng)激素受體促進(jìn)肝臟合成IGF-1，通過(guò)IGF-1促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)，同時(shí)IGF-1反饋抑制垂體生長(zhǎng)激素的釋放，所以血清IGF-1的濃度和血清生長(zhǎng)激素水平在24小時(shí)內(nèi)大致平行。當(dāng)生長(zhǎng)激素缺乏或者肝功能異常時(shí)，會(huì)使得IGF-1降低，因此有嚴(yán)重肝病的孩子升高會(huì)受影響。此外，生長(zhǎng)激素不敏感綜合征的孩子，雖然生長(zhǎng)激素并不缺乏，但不能產(chǎn)生足夠的IGF-1，因此可能會(huì)患上垂體性侏儒癥，成人身材會(huì)非常矮小。所以對(duì)矮小的孩子進(jìn)行生長(zhǎng)激素的測(cè)定(生長(zhǎng)激素激發(fā)試驗(yàn))具有重要意義。

在結(jié)構(gòu)上，IGF-1和IGF-2的氨基酸序列同源性為62％；IGF-1與IGF-2和人胰島素之間的同源性分別為49％和47％。IGF2主要對(duì)胎兒生長(zhǎng)起作用，而兒童及成人體內(nèi)起主要作用的是IGF1。IGF1的產(chǎn)生依賴于生長(zhǎng)激素水平，是生長(zhǎng)激素刺激機(jī)體生長(zhǎng)和代謝的主要調(diào)節(jié)因子。GH對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響是通過(guò)IGF-1介導(dǎo)的，IGF-1是評(píng)價(jià)正常及異常生長(zhǎng)、研究GH生物活性的重要指標(biāo)。

現(xiàn)有技術(shù)中，IGF-1檢測(cè)試劑盒在使用過(guò)程中均需要對(duì)血清樣本進(jìn)行預(yù)稀釋再進(jìn)行檢測(cè)，單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)時(shí)間近50分鐘，檢測(cè)效率較低。另外與常規(guī)的雙抗體夾心法用到兩株抗體不同，待測(cè)物IGF-1是一個(gè)大家族的小肽，具有多種結(jié)構(gòu)相近的類似物。在一定的種類數(shù)量的結(jié)構(gòu)類似物存在時(shí)，標(biāo)記抗體介導(dǎo)被捕捉的抗原分子發(fā)生變構(gòu)，使之形成標(biāo)記抗體與變構(gòu)的抗原分子復(fù)合物，從固相抗體表面解離，最終形成反應(yīng)信號(hào)降低的HD—HOOK現(xiàn)象。因此，即使采用夾心法的兩步清洗，仍會(huì)存在產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，降低檢測(cè)的靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何提高IGF-1的檢測(cè)效率和靈敏度，可用于生長(zhǎng)激素(GH)的缺乏和過(guò)量的輔助診斷上。