[發明專利]TCF1-IRF4在制備預測CLL疾病預后試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202210217062.2
• 申請日: 2022-03-07
• 公開（公告）號: CN114507736A
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 尹青松;梁桃桃;汪小姣;艾昊;王倩
• 申請（專利權）人: 河南省腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 楊蕾

1.TCF1-IRF4在制備預測CLL疾病預后試劑盒中的應用，其特征在于：

①當TCF1的表達水平＜0.67且IRF4的表達水平≥1.99時，CLL患者疾病進展快、臨床預后差的可能性較大；

②當TCF1的表達水平＜0.67或IRF4的表達水平≥1.99時，CLL患者疾病進展快、臨床預后差的可能性相對較大；

③當TCF1的表達水平≥0.67且IRF4的表達水平＜1.99時，CLL患者疾病穩定、臨床預后好的可能性較大。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于：所述預測CLL疾病預后試劑盒中，包括用于擴增TCF1 cDNA的引物和用于擴增IRF4 cDNA的引物，其中，

用于擴增TCF1 cDNA的引物如下：

TCF7 (F): 5' - TCCACCACAGGAGGAAAAAGA - 3'；

TCF7 (R): 5' - CGCAGGGCTAGTAAGCAGTT - 3'；

用于擴增IRF4 cDNA的引物如下：

IRF4 (F): 5' - CGAGAAGGCATCGACAAGCC - 3'；

IRF4 (R): 5' - ATGGACATCTGCGGGTCCTC - 3'。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于：所述預測CLL疾病預后試劑盒中，還包括：

用于擴增內參的引物，具體如下:

GAPDH (F): 5' - GAAGGTGAAGGTCGGAGTCAA- 3'；

GAPDH (R): 5' - GACAAGCTTCCCGTTCTCAG - 3'。

4.如權利要求2所述的應用，其特征在于：所述預測CLL疾病預后試劑盒中，還包括：

用于分離外周血單個核細胞的試劑、用于總RNA提取的試劑、用于逆轉錄PCR的試劑、用于實時定量PCR的試劑中的任意一種或至少兩種。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的用于分離骨髓單個核細胞的試劑為淋巴細胞分離液（Ficoll）。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的用于總RNA提取的試劑為TRIZOL。

7.如權利要求2-6任一項所述的應用，其特征在于，所述預測CLL疾病預后試劑盒可用于非診斷檢測TCF1-IRF4表達。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于：包括如下步驟：

S1、取待測骨髓樣本，分離得到單個核細胞；

S2、在步驟S1得到的單個核細胞中加入總RNA提取的試劑，混勻；

S3、加入氯仿，混勻后進行離心；

S4、吸取上層液體，加入異丙醇后離心去上清；

S5、乙醇洗滌，干燥，得到RNA樣品；

S6、將步驟S5得到的RNA樣品逆轉錄成cDNA；

S7、將步驟S5得到的cDNA，利用所述的試劑盒進行目的基因表達量檢測。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于：

所述的單個核細胞、總RNA提取的試劑、氯仿的配比按5～10×106個細胞：1毫升：0.1～0.3毫升計算；

所述的總RNA提取的試劑為TRIZOL；

步驟S3中，所述的離心的條件為：溫度2～8℃、轉速10000～15000g、時間15～30分鐘；

步驟S4中，所述的異丙醇的用量按上層液體：異丙醇=體積比1～2:1～2計算；離心的條件為：溫度2～8℃、轉速10000～15000g、時間10～20分鐘；

步驟S5中，所述的乙醇洗滌的次數兩次，第一次用75%乙醇在-20℃條件下洗滌，第二次用100%乙醇在-20℃條件下洗滌，每次均勻混合30s后，2～8℃，8000～12000g離心5～10分鐘；干燥為真空離心機干燥；條件為溫度2～8℃、時間5～10分鐘；

步驟S6中，所述的逆轉錄通過用于逆轉錄PCR的試劑實現；

步驟S7中，所述的目的基因表達量檢測通過用于實時定量PCR的試劑實現。