[發明專利]大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體及其構建方法

有效

• 申請號: 202210215798.6
• 申請日: 2022-03-07
• 公開（公告）號: CN114525296B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 費一諾;劉亞菲;耿文鑫;劉沛銘
• 申請（專利權）人: 常州藥物研究所有限公司
• 主分類號: C12N15/78
• 分類號: C12N15/78;C12N15/65;C12N15/64;C12R1/385
• 代理公司: 常州市權航專利代理有限公司 32280
• 代理人: 趙慧

1.一種大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，包括：

抗性篩選基因，復制蛋白基因和表達區片段；

所述表達區片段包括：啟動子、多克隆位點、噬菌體λ的轉錄終止子T₀序列；

所述啟動子及終止子T₀序列前后帶有酶切位點，以及

所述啟動子包括RBS序列；

所述啟動子為P_Syn8，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.如權利要求1所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述啟動子前后帶有Hind?III和BamH?I酶切位點。

3.如權利要求1所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述終止子T₀序列前后帶有Xho?I和EcoR?I酶切位點。

4.如權利要求1所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述啟動子和終止子T₀序列之間具有多克隆位點區域。

5.如權利要求1所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述表達區片段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

6.一種大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，包括：

抗性篩選基因，復制蛋白基因和表達區片段；

所述表達區片段包括：啟動子、多克隆位點、噬菌體λ的轉錄終止子T₀序列；

所述啟動子及終止子T₀序列前后帶有酶切位點，以及

所述啟動子包括RBS序列；

所述啟動子為P_rpsJ，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

7.如權利要求6所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述啟動子前后帶有Hind?III和BamH?I酶切位點。

8.如權利要求6所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述終止子T₀序列前后帶有Xho?I和EcoR?I酶切位點。

9.如權利要求6所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

所述啟動子和終止子T₀序列之間具有多克隆位點區域。

10.一種大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，包括：

抗性篩選基因，復制蛋白基因和表達區片段；

所述表達區片段包括：啟動子、多克隆位點、噬菌體λ的轉錄終止子T0序列；

所述啟動子及終止子T0序列前后帶有酶切位點，以及

所述啟動子包括RBS序列；

所述啟動子和終止子T₀序列之間具有多克隆位點區域；

在表達區片段的多克隆位點插入mScarlet基因，構成含有熒光蛋白基因的表達載體，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

11.如權利要求1或6任一項所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體，其特征在于，

在表達區片段的多克隆位點插入任意目的基因，構成表達相應目的基因的表達載體。

12.一種如權利要求1或6任一項所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體的構建方法，其特征在于，包括：

以克隆載體pUCP18作為骨架載體，使用限制性內切酶Hind?III和EcoR?I雙酶切克隆載體pUCP18；

通過基因合成獲得表達區片段P-MCS-T；

將表達區片段P-MCS-T插入經酶切修飾后的骨架載體pUCP18的多克隆位點之間；

將目的基因插入上述表達區片段的多克隆位點之間。

13.一種如權利要求1或6任一項所述的大腸桿菌-銅綠假單胞菌穿梭表達載體的構建方法，其特征在于，包括：

以克隆載體pUCP18作為骨架載體，使用限制性內切酶Hind?III和EcoR?I雙酶切克隆載體pUCP18；

通過基因合成獲得表達區片段P-MCS-T；

將表達區片段P-MCS-T插入經酶切修飾后的骨架載體pUCP18的多克隆位點之間；

將熒光指示蛋白基因插入上述表達區片段的多克隆位點之間。