[發明專利]一種復發肺癌穿刺樣本類器官培養基及其應用

在審

• 申請號: 202210207476.7
• 申請日: 2022-03-03
• 公開（公告）號: CN114480287A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 宋偉;柏衛華
• 申請（專利權）人: 宋偉;柏衛華
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 上海和華啟核知識產權代理有限公司 31339
• 代理人: 余昌昊

本發明公開了一種復發性肺癌穿刺樣本類器官的培養基及其培養方法。通過調整培養基各組分的含量，能夠實現對復發性肺癌穿刺樣本的類器官培養，大大提高了肺癌類器官培養成功率，縮短培養周期，為揭示復發性肺癌發病機理和篩選抗癌藥物奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，具體的涉及一種復發性肺癌類器官的培養基及其培養方法。

背景技術

肺癌居全球范圍內癌癥發病和死因之首，每年全球有180萬新發肺癌病例，160萬例死亡病例，因分期和地區不同，肺癌患者5年生存率在4％-17％。在中國的癌癥死亡率中，肺癌仍然排名第一，2020年有72萬國人死于肺癌，約占全球死亡人數一半。肺癌有臨床癥狀發現時往往是晚期，因此患者已經喪失了手術根治的機會，一般選擇靶向治療，化療或者放療。肺癌是目前擁有最多靶向藥的一個癌種，但眾多的靶向藥也給臨床選藥帶來了糾結，面對同一個突變時，究竟哪種靶向藥是最合適的，二代基因測序并不能給臨床一個滿意的回答。另外針對化療藥物的選擇，目前只能根據指南和臨床醫生的經驗選擇，缺乏明確的個性化治療的指導依據。

同時肺癌病人絕大多數在治療過程中會出現靶向藥物耐藥，臨床往往采取再次基因測序證實是否有新的突變繼而采用新的靶向藥物或化療藥物，在反復的耐藥過程中，病人往往出現無藥可用的局面，臨床醫生也束手無策，只能讓病人直接試藥，有沒有一種可以代替病人試藥的體外模型，這是臨床肺癌治療迫切需要解決的難題。

類器官是將具有干性潛能的細胞進行3D培養，從而形成相應器官的類似組織，類器官能最大程度地模擬體內組織結構及功能并能長期傳代培養。目前已成功建立了肺、胃、小腸、大腸、肺臟、胰腺、前列腺等腫瘤類器官模型。腫瘤類器官的遺傳背景與其來源腫瘤組織遺傳背景高度一致：腫瘤類器官中的遺傳突變與對應腫瘤活組織標本中的突變高度匹配，并與以往大規模的腫瘤突變分析結果相一致。腫瘤類器官也可以在基因表達譜、蛋白質譜、病理形態、腫瘤異質性等方面很好地模擬患者原位腫瘤。另外多項研究結果表明，類器官對藥物的反應可以用來預測患者的臨床療效。例如一項關于囊性纖維化的研究表明，其類器官的藥物反應情況與已發表的臨床試驗數據結果一致。2018年Science雜志一項最新研究表明，腫瘤類器官對藥物的反應與轉移性胃腸道腫瘤患者臨床療效高度一致，提示88％陽性預測率，100％的陰性預測率，為腫瘤類器官作為精準醫療的篩藥工具提供了有力的支撐。

雖然原發肺癌類器官培養國內外已經有很多報道，但是復發肺癌穿刺樣本因腫瘤細胞較少，原有培養體系不適合而培養成功率較低，因此復發肺癌穿刺樣本類器官的成功培養和穩定藥物敏感性測試可為復發肺癌的精準醫療提供可靠保證。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種適宜復發性肺癌穿刺樣本的類器官培養的培養基，進而獲得復發肺癌類器官，以便能夠研究復發肺癌發病機制和病程以及篩選相關抗癌藥物。

為解決上述技術問題，本發明第一方面提供一種復發肺癌的類器官培養基，所述培養基成分包括如下成分：

DMEM/F12K/1640培養基(1:1:1-2)，抗壞血酸(1-100mg/L)，L-谷氨酸(1-100mg/L)，亞硒酸鈉(0.002-0.5mg/L)，乙醇胺鹽酸鹽(2-200mg/L)，偏釩酸銨(1×10^-4-20×10^-4mg/L)，四水合氯化錳(5×10^-5-50×10^-5mg/L)。

R-spondin1(50-1000ng/ml)，Noggin(10-200ng/ml)，N2:B27(0.1-2)，谷氨酰胺補劑(1×)，HEPES(1×)，煙酰胺(1-100mM)，Normocin^TM(1×)，N-乙酰半胱氨酸(0.1-10mM)，Wnt3a(10-500ng/ml)。

優選的，所述培養基中還包括肝素，進一步優選的，所述肝素濃度為10-200IU/ml。