[發明專利]一種亞細胞區室化生產衣康酸的解脂耶氏酵母工程菌及應用

在審

• 申請號: 202210206191.1
• 申請日: 2022-03-02
• 公開（公告）號: CN114561309A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 于愛群;榮蘭新;盧志慧;王亞平;肖冬光;張翠英
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/60;C12N15/62;C12N15/81;C12P7/44;C12R1/645
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以解脂耶氏酵母為出發菌株，通過導入順-烏頭酸脫羧酶編碼基因獲得。

2.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述順-烏頭酸脫羧酶編碼基因，其核苷酸如序列表SEQ ID NO.1所示。

3.如權利要求2所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述順-烏頭酸脫羧酶編碼基因是通過質粒在宿主細胞中表達。

4.如權利要求3所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述質粒為pYLEX1。

5.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述順-烏頭酸脫羧酶編碼基因通過增強型過氧化物酶體定位信號ePTS1在過氧化物酶體中進行定位表達。

6.如權利要求5所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，將ePTS1編碼基因連接到順-烏頭酸脫羧酶編碼基因后，構建重組質粒pYLEX1-CAD-ePTS1，并將重組質粒導入解脂耶氏酵母出發菌株中進行表達。

7.如權利要求5所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述ePTS1編碼序列如序列表SEQ ID NO.2所示。

8.如權利要求1所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述解脂耶氏酵母出發菌株為解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)Po1gΔku70。

9.權利要求1-8任意一項所述的一種解脂耶氏酵母基因工程菌在生產衣康酸中的應用。

10.如權利要求9所述的應用，采用所述工程菌生產衣康酸的方法如下：

將工程菌種子液按1％接種量接種至YPD培養基中，28-30℃，200-220r/min條件培養15-18h，再轉接至YPO培養基中使OD₆₀₀達到0.1左右，28-30℃，200-220r/min條件下發酵6天；

所述YPO培養基組成成分為：蛋白胨18-22g/L，酵母浸粉8-12g/L，廚房廢油1.1-1.2％，吐溫80 0.18-0.22％，余量為水，115-121℃，滅菌20min。