[發明專利]一種基于平衡補償的重組流感病毒構建方法有效
| 申請號： | 202210201573.5 | 申請日： | 2022-03-03 |
| 公開（公告）號： | CN114574521B | 公開（公告）日： | 2023-09-12 |
| 發明（設計）人： | 杜瑞坤;崔清華;榮立軍;趙秀娟 | 申請（專利權）人： | 山東中醫藥大學;山東中醫藥大學青島中醫藥科學院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/53;C12N7/01;A61K49/00;C12R1/93;A61K39/00 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 趙穎 |
| 地址： | 250355 山東省濟*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 平衡 補償 重組 流感病毒 構建 方法 | ||
1.一種重組流感病毒的構建方法，其特征在于，所述方法基于平衡補償的原則，在插入外源基因的目標節段引入補償性突變，所述補償性突變能夠重新實現重組病毒基因組多節段的微平衡，產生具備遺傳穩定性的重組流感病毒；
其包括如下步驟：
a?質粒材料制備，在插入外源基因的目標節段引入補償性突變；
b?病毒拯救，將病毒拯救質粒共同轉染到宿主細胞中，經共同培養后，從上清液中收獲重組流感病毒，反向遺傳學拯救帶有突變的重組流感病毒；
其中，所述插入外源基因的目標節段為NS；
所述外源基因為Gluc或Fluc；
所述補償性突變為啟動子增強突變；
所述啟動子增強突變為在NS-Gluc片段的3'NCR上引入額外突變G3A/C8U和在NS-Fluc片段的3'NCR上引入額外突變G3A/U5C/C8U。
2.根據權利要求1所述的方法制備得到的重組流感病毒。
3.一種重組報告流感病毒，其特征在于，在流感病毒的目標節段中插入報告基因，并且在插入所述報告基因的所述目標節段中引入補償性突變，所述補償性突變能夠重新實現重組報告流感病毒基因組多節段的微平衡，產生具備遺傳穩定性的重組報告流感病毒；
其中，所述報告基因為Gluc，所述重組報告流感病毒為PR8-NS38m-Gluc，其平衡補償后NS節段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?1所示；
或所述報告基因為Fluc，所述重組報告流感病毒為PR8-NS358m-Fluc，其平衡補償后NS節段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?2所示。
4.根據權利要求1所述的重組流感病毒的構建方法、權利要求2所述的重組流感病毒或權利要求3所述的重組報告流感病毒在構建流感小鼠的活體成像模型中的應用。
5.根據權利要求1所述的重組流感病毒的構建方法、權利要求2所述的重組流感病毒或權利要求3所述的重組報告流感病毒在開發其他高致病性病毒或細菌的減活流感病毒載體疫苗中的應用。
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