[發明專利]基于Fe-PDAN的高效熒光淬滅試紙條及其制備方法和檢測方法

在審

• 申請號: 202210196123.1
• 申請日: 2022-03-01
• 公開（公告）號: CN114720437A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 鄧省亮;賴衛華;賴曉翠;章鋼剛;陳愛亮;蘇柳;賀偉華
• 申請（專利權）人: 江西省科學院微生物研究所（江西省流域生態研究所）
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 南昌大牛知識產權代理事務所(普通合伙) 36135
• 代理人: 劉俊文

1.一種基于Fe-PDAN的高效熒光淬滅試紙條，其特征在于，所述熒光淬滅試紙條以Fe-PDAN作為信標載體；所述Fe-PDAN為鐵離子配位聚多巴胺形成的金屬多酚網絡微球，其制備過程包括以下步驟：將鹽酸多巴胺溶液加入至FeCl₃溶液中，攪拌反應后形成配位化合物，再加入Tris溶液，鹽酸多巴胺于堿性條件下氧化聚合形成聚多巴胺，反應結束后離心棄上清，清洗沉淀物后將沉淀物復溶于緩沖液中，即制得Fe-PDAN。

2.根據權利要求1所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，包括底板，以及在底板上依次搭接粘貼的樣本墊、玻璃纖維墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述玻璃纖維墊上噴涂有Fe-PDAN待測物抗體復合物，所述Fe-PDAN待測物抗體復合物由所述Fe-PDAN和待測物抗體制得。

3.根據權利要求2所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，所述Fe-PDAN待測物抗體復合物的制備過程如下：向所述Fe-PDAN中加入所述待測物抗體，混勻，室溫反應2h，然后加入封閉劑，室溫反應2h，離心取沉淀，復溶后得到所述Fe-PDAN待測物抗體復合物。

4.根據權利要求3所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，向所述Fe-PDAN中加入所述待測物抗體前，先對所述Fe-PDAN進行預處理，預處理的過程為：將所述Fe-PDAN超聲1-10min，再用0.01-0.5M、pH＝6-8的硼酸鹽緩沖液調節所述Fe-PDAN的濃度至0.01-0.1mg/mL。

5.根據權利要求3所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，加入所述待測物抗體后的所述待測物抗體終濃度為1-100μg/mL，加入所述封閉劑后的所述封閉劑的終濃度為0.1-1％，所述封閉劑為酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、聚乙二醇、脫脂牛奶中的任意一種。

6.根據權利要求3所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，離心的轉速為5000-20000r/min，時間為10-50min，離心后得到的沉淀采用0.01-0.1M、pH＝6-9的磷酸鹽緩沖液復溶。

7.根據權利要求2所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，所述待測物抗體為單克隆抗體、多克隆抗體、納米抗體或噬菌體表達抗體。

8.根據權利要求2所述的熒光淬滅試紙條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上包被有待測物人工偶聯抗原和量子點熒光微球作為檢測線，包被有抗鼠抗體或抗兔抗體為二抗作為質控線。

9.一種權利要求1至8任一項所述的熒光淬滅試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將樣本墊、噴涂有Fe-PDAN待測物抗體復合物的玻璃纖維墊、噴涂有待測物人工偶聯抗原和量子點熒光微球作為檢測線且噴涂有抗鼠抗體或抗兔抗體為二抗作為質控線的硝酸纖維素膜、吸水紙依次搭接粘貼在底板上，即組裝完成。

10.一種權利要求1至8任一項所述的熒光淬滅試紙條的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：將待測物樣本加樣至所述熒光淬滅試紙條的樣本墊上，加樣體積50-200μL，反應時間為3-30min，通過讀取所述熒光淬滅試紙條的熒光強度數據后由內置標準曲線計算待測物樣本濃度實現定量檢測，在紫外燈照射下通過肉眼觀察檢測線有無熒光條帶來實現對檢測樣本的定性判斷。