[發明專利]一種大萼香茶菜皂苷A和B單體的分離純化方法及其應用

有效

• 申請號: 202210195343.2
• 申請日: 2022-03-01
• 公開（公告）號: CN114349808B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 李俊;黃艷;李健;關欣蘭;鄧勝平
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H15/24;C07H1/08;A61K31/7048;A61K31/704;A61P31/20
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 覃永峰

本發明公開了一種大萼香茶菜皂苷A和B單體的分離純化方法及其應用，所述方法為采用包括弱極性或非極性苯乙烯型大孔吸附樹脂吸附等分離手段，然后經過正相硅膠色譜柱層析，最后以備反相硅膠Csubgt;18/subgt;色譜柱層析純化，從大萼香茶菜全植株中分離得到1個二萜苷和1個三萜苷新化合物。本發明通過最適宜的工藝及參數條件的組合，可有效除去大萼香茶菜中的大量雜質，一次性可獲取1個萜二苷和1個三萜苷，活性測定實驗表明，新化合物具有抗HBV活性，為今后對大萼香茶菜的進一步的藥理活性篩選及臨床研究開發出療效確切、毒副作用小的抗HBV藥物奠定了物質基礎。

技術領域

本發明涉及中藥活性成分的分離提純技術領域，具體是一種大萼香茶菜皂苷A和B單體的分離純化方法及其應用。

背景技術

大萼香茶菜(Isodon?macrocalyx)屬于唇形科(Lamiaceae)香茶菜屬(Isodon)屬植物。大萼香茶菜具有清熱解毒的功效，民間用該植物治療頭痛發熱、汗出惡風、咳嗽胸痛、肺燥干咳無痰等疾病。迄今為止，未見有關對大萼香茶菜的化學成分及其生物活性的研究報道。大萼香茶菜中除含有大萼香茶菜皂苷外，還含有木脂素類、香豆素類、黃酮類、生物堿類、多糖類等的成分，較難實現大萼香茶菜皂苷與其他物質的分離，且大萼香茶菜皂苷的含量低，結構及理化性質很相似，很難通過簡單的分離方法一次獲得多個大萼香茶菜皂苷的單體。

為了更深入研究大萼香茶菜的成分，開發和利用該植物，尋找一種提取率高、成本低和易于工業化生產大萼香茶菜皂苷A和B分離純化的工藝，為研究大萼香茶菜的抗HBV活性、構效關系，以及應用開發奠定了基礎。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，而提供一種大萼香茶菜皂苷A和B單體的分離純化方法及其應用。這種方法能有效除去大萼香茶菜中的大量雜質，一次性可獲取2個新大萼香茶菜皂苷，從而可為大萼香茶菜皂苷類化合物的抗HBV活性研究和單一成分的新藥開發提供物質基礎。

實現本發明目的的技術方案是：

一種大萼香茶菜皂苷A和B單體的分離純化方法，包括如下步驟：

1)將大萼香茶菜全植株用10-15個質量比的50％-75％乙醇水溶液提取，得到大萼香茶菜全植株的提取物，回收提取液的乙醇后，余下的水部分用10倍蒸餾水稀釋，得到大萼香茶菜全植株粗提物水溶液；

2)將步驟1)得到的大萼香茶菜全植株粗提物水溶液進行弱極性或非極性苯乙烯型大孔吸附樹脂柱層析，充分吸附后，用4-6個柱體積蒸餾水沖洗，去除未被吸附的雜質，再依次各用4-6個柱體積的20％-30％乙醇水溶液洗脫、棄去洗脫液，然后以4-6個柱體積的31％-60％乙醇水溶液洗脫，濃縮洗脫液，得到富含大萼香茶菜皂苷A和B的洗脫部分，其中，大孔吸附樹脂為D101或AB-8，優選的大孔樹脂吸附量大，洗脫容易，吸附動力學性能良好，對無機酸、鹽、蛋白、糖類、小分子親水性有機物均不吸附，因而可將一般苷類物質與這些物質分離，在較短的時間內取得較好的分離效果。

3)用甲醇溶解步驟2)得到的31％-60％乙醇水溶液洗脫部分樣品，然后進行硅膠色譜柱層析，依次各用4-6個柱體積的70％-30％的二氯甲烷與30％-70％的甲醇混合液作為洗脫劑進行洗脫，棄去70％的二氯甲烷與30％的甲醇混合液洗脫液，收集30％的二氯甲烷與70％的甲醇混合液洗脫物；

4)將步驟3)收集的30％的二氯甲烷與70％的甲醇混合液洗脫物進行高效液相色譜C₁₈柱層析，獲得大萼香茶菜皂苷A和B，它們都是新化合物、結構式分別如式(I)所示：

步驟1)中所述的大萼香茶菜全植株的提取物由如下方法制得：將大萼香茶菜全植株粉碎、加入全植株10-15倍質量的濃度為50％-75％的乙醇水溶液，加熱回流提取2-3次，減壓濃縮、干燥，得大萼香茶菜全植株的提取物，這種提取方法可以將大萼香茶菜全植株中的大量雜質去除，確保提取物中主要含有苷類等有機成分。

步驟3)中所述硅膠色譜柱為正相硅膠色譜柱。