[發(fā)明專利]一種毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210194122.3
• 申請(qǐng)日: 2022-03-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114480433A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚志堅(jiān);周德榮;蔣嘉豪;林瑞慶;翁亞彪;劉麗丹;王新秋;黃儀娟;劉葉萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佛山市正典生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/30
• 分類號(hào): C12N15/30;C07K14/455;C12N15/70;A61K39/012;A61P33/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發(fā)明公開(kāi)了一種毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用。所述毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗包括毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。本發(fā)明以毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白作為亞單位疫苗候選蛋白，深入分析其信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域，創(chuàng)造性地去除信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域的多肽序列，發(fā)現(xiàn)其能夠有效激發(fā)雞抵抗毒害艾美耳球蟲(chóng)感染的免疫保護(hù)力，即可作為高效亞單位疫苗，且序列顯著簡(jiǎn)化，利于制備和純化，能夠?qū)崿F(xiàn)高效、低成本制備，具有廣泛推廣應(yīng)用的潛質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

雞球蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的原蟲(chóng)病，可以導(dǎo)致雞采食量減少、營(yíng)養(yǎng)不良、飼料轉(zhuǎn)換率下降甚至死亡。其中毒害艾美耳球蟲(chóng)(E.necatrix)是7種雞球蟲(chóng)中致病性最強(qiáng)的球蟲(chóng)之一。目前，雞球蟲(chóng)病的防治主要以藥物和疫苗為主，但隨著耐藥性的上升，藥物防治的作用效果明顯降低，所以疫苗預(yù)防變得更為重要。但目前市面上的疫苗難以應(yīng)對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)，主要是因?yàn)槎竞Π蓝蛳x(chóng)的第1、2代裂殖生殖發(fā)生在小腸，第3代裂殖生殖和配子生殖發(fā)生在盲腸，分別與巨型和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的寄生部位相同從而存在擁擠效應(yīng)，用雞球蟲(chóng)病多價(jià)活蟲(chóng)疫苗免疫時(shí)，疫苗株的后代卵囊中毒害艾美耳球蟲(chóng)卵囊較少，較難形成完全的免疫保護(hù)力，故用雞球蟲(chóng)病活疫苗免疫也難以防控毒害艾美耳球蟲(chóng)引發(fā)的疾病。因此，目前急需研發(fā)一種有效防控毒害艾美耳球蟲(chóng)的疫苗。

目前已應(yīng)用的球蟲(chóng)疫苗主要為活疫苗，但活疫苗因?yàn)樯鲜鲈螂y以對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)進(jìn)行預(yù)防，難以滿足生產(chǎn)需求。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，新一代疫苗如亞單位疫苗的出現(xiàn)給疫苗研發(fā)提供了新方法，隨著技術(shù)的發(fā)展與成熟逐漸在養(yǎng)殖行業(yè)發(fā)揮重要作用。亞單位疫苗含有病原體某種或多種特異性抗原，能夠激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答的免疫原成分，但不具有在機(jī)體內(nèi)復(fù)制和致病的能力，所以接種亞單位疫苗能夠使雞獲得免疫保護(hù)力的同時(shí)不受活疫苗毒副作用的威脅，安全可靠。而目前已商用亞單位疫苗是使用艾美耳球蟲(chóng)的配子體抗原制備而成，如CN111514284A公開(kāi)了一種雞球蟲(chóng)多價(jià)重組蛋白疫苗及其制備方法和應(yīng)用，所述雞球蟲(chóng)多價(jià)重組蛋白疫苗包含4種雞球蟲(chóng)蛋白：柔嫩艾美耳球蟲(chóng)棒狀體蛋白41，柔嫩艾美耳球蟲(chóng)配子體蛋白22，巨型艾美耳球蟲(chóng)配子體蛋白56，和堆型艾美耳球蟲(chóng)裂殖子蛋白Ea3-1E，將上述4種雞球蟲(chóng)蛋白分別與大腸桿菌表達(dá)載體相連獲重組表達(dá)載體，表達(dá)重組蛋白，將不同種重組蛋白按比例與佐劑混合，免疫母雞后的后代雛雞接種球蟲(chóng)后與未免疫母雞后代雛雞相比，能夠有效提高接種球蟲(chóng)的雛雞存活率和相對(duì)增重，卵囊排出量減少，顯示了良好的母源免疫效果，但生產(chǎn)耗時(shí)、難度較高，難以廣泛推廣應(yīng)用。

綜上所述，開(kāi)發(fā)針對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)的高效亞單位疫苗，簡(jiǎn)化工藝降低成本，對(duì)于雞球蟲(chóng)病防治領(lǐng)域具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足和實(shí)際需求，本發(fā)明提供一種毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明利用毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白作為亞單位疫苗，所述亞單位疫苗能夠有效激發(fā)雞抵抗毒害艾美耳球蟲(chóng)感染的免疫保護(hù)力，成分簡(jiǎn)單、易制備且整體成本低，具有廣泛推廣應(yīng)用的潛質(zhì)。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供一種毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)亞單位疫苗包括毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。

本發(fā)明中，以毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG13蛋白作為亞單位疫苗候選蛋白，深入分析其信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域，創(chuàng)造性地去除信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域的多肽序列，發(fā)現(xiàn)其能夠有效激發(fā)雞抵抗毒害艾美耳球蟲(chóng)感染的免疫保護(hù)力，即可作為高效亞單位疫苗，且序列顯著簡(jiǎn)化，更利于制備和純化，能夠?qū)崿F(xiàn)高效、低成本制備，具有廣泛推廣應(yīng)用的潛質(zhì)。

SEQ ID NO.1：