[發(fā)明專利]一種多能干細(xì)胞的傳代方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210190050.5
• 申請(qǐng)日: 2022-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN114807018B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋蕓娟;蔣斌;溫斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市曠逸生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0735
• 分類號(hào): C12N5/0735;C12N5/074;B26D1/00;B26D7/26
• 代理公司: 深圳市合道英聯(lián)專利事務(wù)所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果

1.一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，該方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：

S1、在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)多能干細(xì)胞，得到多能干細(xì)胞集落；

S2、將達(dá)到70~80%融合的hES移除培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，并使傳代工具在盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面移動(dòng)，從右至左，依次推滾傳代工具；

所述傳代工具為一彈簧切割器，所述彈簧切割器包括精密彈簧（1）、滾軸（2）和鑷子，所述滾軸（2）的外側(cè)壁上設(shè)置有卡槽（21），使用時(shí)，將所述精密彈簧（1）套設(shè)在滾軸（2）上，并將所述鑷子的端部嵌入滾軸（2）外側(cè)壁上的卡槽（21）中，用于壓縮精密彈簧（1）和調(diào)節(jié)精密彈簧（1）間距；

S3、水平轉(zhuǎn)動(dòng)所述培養(yǎng)皿的方向，并重復(fù)所述S2的工序，獲得切割后的多能干細(xì)胞片；

S4、向所述培養(yǎng)皿中加入解離液，并放入36~38℃、5%CO₂培養(yǎng)箱孵育3~7min，獲得收縮后的多能干細(xì)胞片；

S5、吹次所述培養(yǎng)皿的底部，洗脫所述收縮后的多能干細(xì)胞片，并移入離心管中；

S6、加入所述解離液，并重復(fù)所述S5的工序，獲得洗脫后的多能干細(xì)胞片；

S7、對(duì)所述洗脫后的多能干細(xì)胞片進(jìn)行離心，去除上清液，得到離心后的多能干細(xì)胞；所述解離液是由1×DPBS添加了2500~3500mg/L的葡萄糖構(gòu)成；

S8、向所述離心后的多能干細(xì)胞中加入新的培養(yǎng)基重懸后，再按照1：（4~6）的比例將重懸后的多能干細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)皿中，即完成了多能干細(xì)胞的傳代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述精密彈簧（1）的直徑為5~10mm；構(gòu)成所述精密彈簧（1）的彈簧絲的直徑為0.1~0.2mm，所述彈簧絲的長(zhǎng)度為1~2cm；所述彈簧絲的間距為0.1~0.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述滾軸（2）的直徑為4~8mm，高度為1~2cm；所述卡槽（21）至少設(shè)置為兩個(gè)，至少兩個(gè)所述卡槽（21）的長(zhǎng)、寬、高均為1~2mm，至少兩個(gè)所述卡槽（21）的間距為0.2~0.8cm。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述鑷子端部為平頭，且端部的厚度為0.2~0.4mm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述S3中，所述水平轉(zhuǎn)動(dòng)的角度范圍為85°~95°。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述S6中，加入所述解離液的體積為2~7ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種多能干細(xì)胞的傳代方法，其特征在于，所述S7中，所述離心時(shí)的轉(zhuǎn)速為500~1000rpm。