[發明專利]SRSF5結合蛋白的PCR檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210185587.2
• 申請日: 2022-02-28
• 公開（公告）號: CN114317836A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 余樹芳;袁旦一;陳斌;何謙;辜良斌;李曉琪;張丹
• 申請（專利權）人: 成都納比微特檢測技術服務有限公司;成都納比生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 重慶樂泰知識產權代理事務所(普通合伙) 50221
• 代理人: 林慰敏

本發明屬于流感病毒檢測技術領域，具體的，涉及一種流感病毒生命周期中與病毒RNA相互作用的關鍵RNA結合蛋白SRSF5的PCR檢測試劑盒及檢測方法?，F有實時熒光定量PCR技術在檢測流感病毒時通常是檢測流感病毒本身，對感染的宿主的相關檢測較少，還未見有檢測宿主細胞中SRSF5結合蛋白的PCR技術，為此，本發明提供了一種流感病毒生命周期中關鍵RNA結合蛋白SRSF5的實時熒光定量PCR檢測試劑盒，通過相對定量檢測與流感病毒密切相關的宿主體內的SRSF5結合蛋白，來判斷機體內的流感感染情況。本發明的檢測試劑盒準確性好，靈敏度好，不易受到流感病毒突變的影響，適宜推廣使用。

技術領域

本發明屬于流感病毒檢測技術領域，具體的，涉及一種流感病毒生命周期中與病毒RNA相互作用的關鍵RNA結合蛋白SRSF5的PCR檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

流感病毒是一種具有高度傳染性的人畜共患病病原，在世界范圍內具有較高的發病率和死亡率，對全球的公共衛生安全造成了較為嚴重的威脅。目前控制世界各地季節性流感疫情爆發的唯一方法是疫苗，但由于流感病毒毒株經常變異，導致抗原表位預測和疫苗生產相對滯后，從而影響了疫苗的有效使用。宿主感染病毒后其先天免疫系統被激活以限制病毒復制和清除病原體，隨后宿主獲得性免疫參與特異性病毒清除。另外，病毒也通過多種策略避免被宿主免疫識別和消除。

流感病毒屬于正黏病毒科，是一種能夠感染人、禽、豬和犬，甚至是鯨魚、貂和海豹等的有囊膜結構、分節段的負鏈RNA病毒。流感病毒根據M和NP抗原性的不同又可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，以及近年來新發現的丁型(D)，這四種類型的流感病毒具有不同的致病性和宿主范圍。目前，以甲型流感病毒(Influenza A virus，IAV)的危害最大、流行也最為廣泛，因為它不僅能夠給畜禽養殖業帶來巨大的經濟損失，而且能夠跨物種傳播感染并致死哺乳動物，全世界每年因流感病毒感染導致的死亡人數在29萬到65萬之間，這給公共衛生安全帶來極大的威脅。另外，在免疫壓力的作用下流感病毒的抗原性不斷發生變異，從而逃逸宿主的免疫監視，產生新的流行毒株。近年來,多種禽流感病毒的出現及其在世界范圍內的流行,導致人感染禽流感病毒的病例增加,加劇了禽流感病毒的公共衛生學危害，特別是H5、H7和H9亞型。

由于流感病毒經常變異，導致抗原表位預測和疫苗生產相對滯后，從而影響了疫苗的有效使用。此外，一些抗病毒藥物的使用，包括金剛烷胺和神經氨酸酶抑制劑等，導致禽流感病毒的耐藥性正在不斷增強。由于流感病毒需要利用宿主的轉錄翻譯系統進行復制，所以宿主蛋白在流感病毒維持其生命周期及致病性中具有非常重要的作用。

實時熒光定量PCR技術是美國Applied Biosystems公司在1996年研發出來的一種新技術，此種技術不但能夠解決PCR污染的問題，還具有較高的自動化程度以及較強的特異性。采用此種技術對流感病毒進行檢測診斷時，由于將實時PCR技術與逆轉錄技術結合了起來，因此被叫做定量“RT-PCR”技術。結合起來的這種技術能夠用少量的RNA識別出在某個特定時間、細胞以組織內的特定基因，將此種技術應用在檢測流感病毒檢測診斷的臨床上，為提高診斷準確性提供了可靠的依據。

實時熒光定量PCR技術是通過對PCR擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測來實現了對起始模板定量以及定性的分析，在這個擴增反應中，將熒光化學物質引入其中，熒光強度的信號會隨著擴增反應的進行而逐漸加強，此時所監測到的信號就可以繪制成一條曲線，然后對未知模板進行定量分析。在實際檢測的過程中，既有特異性引物存在，還有核苷酸探針存在，其目的都是在進行擴增反應時，利用聚合酶的活性將探針進行水解，使其水解成單核苷酸，此時有力的熒光報告基因導致的熒光信號的增加，就會通過熒光信號強度進行的實時動態進行檢測，從而達到對擴增反應產物進行定量的分析。