[發明專利]一種抗逆性強的萊茵衣藻表達蛋白的方法

在審

• 申請號: 202210185369.9
• 申請日: 2022-02-28
• 公開（公告）號: CN114574515A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 吳寅嵩;譚瑩瑩;萬民熙;陳麗麗;李素雯;曹煜梟
• 申請（專利權）人: 修實生物醫藥（南通）有限公司
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N15/12;C07K14/47;C12N1/13;C12R1/89
• 代理公司: 濟南市易拓知識產權代理事務所(普通合伙) 37325
• 代理人: 江莉莉

1.一種抗逆性強的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，制備方法包括：

（1）抗凋亡基因與目的基因的連接；

（2）表達載體的構建；

（3）擴增及質粒提取；

（4）電轉化及檢測。

2.如權利要求1所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述抗凋亡基因為Bcl-xL，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如權利要求1所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述抗凋亡基因為Bcl-xL，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如權利要求1所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

（1）將抗凋亡基因Bcl-xL和目的蛋白基因連接至表達載體，構建重組質粒；

（2）將構建好的質粒轉人大腸桿菌中，LB培養基搖床培養，離心收集菌體；

（3）接種衣藻，光照培養至對數生長期；

（4）電轉化，搖床培養；

（5）抗逆性檢測。

5.如權利要求4所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌搖床培養溫度為30-37℃，更優選地，所述培養溫度為37℃，培養轉速為200-250rpm，更優選地，為220rpm；，培養時間為10-30h；更優選地，為15-20h；最優地，為16h。

6.如權利要求4所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）接種衣藻后培養方法為光照培養，優選為弱光培養。

7.如權利要求4所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述光照培養的培養溫度為20-40℃，更優選地，所述培養溫度為20-30℃；最優地，所述培養溫度為25℃，所述光照培養的光照強度為100-300μmol／(m²·s)，更優選地，所述光照強度為120-180μmol／(m²·s)；最優地，所述光照強度為150 μmol／(m²·s)。

8.如權利要求4所述的萊茵衣藻的制備方法，其特征在于，所述電轉化后挑取單菌落至96孔板，置于搖床進行培養，所述96孔板還添加含博來霉素（2μg/ml）的TAP培養基。