[發明專利]一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法

在審

• 申請號: 202210179050.5
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114480210A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 杜榮;蔡宏;曾松江;汪遠昊
• 申請（專利權）人: 萬之源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;B01J13/04;C09K17/14;A01N63/27;A01N63/22;A01N25/28;A01P21/00;C09K101/00;C09K109/00;C12R1/125;C12R1/38;C12R1/39
• 代理公司: 北京中普鴻儒知識產權代理有限公司 11822
• 代理人: 林桐苒

1.一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，包括有以下主要步驟：

（1）制備微膠囊骨架主料

1.1將棉稈進行粉碎、脫灰、脫蠟并干燥制得棉稈粉末；

1.2 將60~80%硫酸、棉稈粉末和γ-戊內酯按1:10:100投料，混合均勻、加熱攪拌一段時間，水洗至中性并過濾收集濾渣；

1.3 將步驟1.2的濾渣用去離子水煮沸，加入質量分數為15%氫氧化鈉溶液再煮沸得到漿料；

1.4按照質量比為1:2:2取漿料、次氯酸鈉、過氧化氫混合，攪拌反應一段時間后，用稀鹽酸酸化后濾出，分別收集濾渣和濾液；

1.5 往步驟1.4的濾渣加入氫氧化鈉溶液反應制得堿性纖維素；將堿性纖維素和氯乙烷投入加壓釜，在220℃溫度下與4Mpa壓力下進行反應獲得骨架主料；

（2）構建復合菌群體系

2.1將1.4步驟制得的濾液pH值調節為中性，加入過量的70%乙醇，過濾收集不溶物并洗滌干燥獲得半纖維素；

2.2 制備培養基料：半纖維素、葡萄糖和海藻酸鈉混合均勻；

2.3 將Rs-198菌株、綠針假單胞菌R5菌株、枯草芽孢桿菌GB03菌株培養至馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，發酵培養至對數生長期，后制成微生物混合液；

（3）制備中空微膠囊

3.1 將步驟（1）制備獲得的骨架主料、聚乙烯加入到有機溶劑環已烷中，骨架主料、聚乙烯和環已烷的質量比為1:1:1.5，開動電動攪拌器加熱攪拌，獲得骨架漿料；

3.2制備CaCO₃微粒芯材：將CaCl₂溶液和Na₂CO₃溶液充分混合并恒溫超聲分散；

3.3按照質量比1:2取步驟3.2的CaCO₃微粒芯材和3.1步驟制備的骨架漿料混合攪拌；

3.4冷卻至室溫使微膠囊固化后過濾回收微膠囊，再環已烷洗滌收集微膠囊；

3.5 將3.4步驟制備的微膠囊使用檸檬酸處理后水洗至中性，獲得中空微膠囊溶液；

（4）制備復合菌微膠囊

4.1 步驟2.2的培養基料和步驟2.3微生物混合液液滴加到步驟（3）制備的中空微膠囊溶液中，靜置固化后粉碎制得復合菌微膠囊。

2.根據權利要求1所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊制備方法，其特征在于，步驟1.2中，加熱溫度控制在80~100℃，攪拌反應時間為1~2h，反應后趁熱過濾。

3.根據權利要求1所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，步驟1.3中，將步驟1.2的濾渣用去離子水煮沸1.5~2.5h，加入質量分數為15%的氫氧化溶液再煮沸1.5~2.5h。

4.根據權利要求3所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，將漿料、次氯酸鈉和過氧化氫混合后于35~45℃下攪拌反應40~60min，再加入反應料液體積20%的稀鹽酸酸化10~15min濾出。

5.根據權利要求4所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，步驟1.4中，調節收集的濾渣的pH值至中性，洗滌并干燥。

6.根據權利要求1所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，步驟1.5中，氫氧化鈉溶液的質量分數為30%，濾渣和氫氧化鈉溶液的質量比為1：2，濾渣和質量分數為30%的氫氧化鈉溶液混合后于30~40℃下攪拌反應40~60min，得到堿性纖維素；堿性纖維素與氯乙烷的質量比為1：5。

7.根據權利要求1所述的一種治理鹽堿化促棉花生長的復合菌微膠囊的制備方法，其特征在于，步驟2.2中，半纖維素、葡萄糖和海藻酸鈉的質量比為1：1：5；

步驟2.3中，Rs-198菌株、綠針假單胞菌R5菌株、枯草芽孢桿菌GB03菌株按1：1：1比例混合，發酵培養的條件為：

溫度為35~37℃；

pH為7.0～7.5。