[發明專利]一種酶催化甲基腰果酚的制備方法

在審

• 申請號: 202210176560.7
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114457124A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 陳小龍;呂旭浩;周家偉;陸躍樂;朱林江
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P7/00
• 分類號: C12P7/00;C12N15/70;C12N15/54;C12N9/10
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

1.一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于：

向反應器中加入腰果酚、甜菜堿、重組甲基轉移酶、磷酸鹽緩沖液，調節pH值、溫度，反應后得到甲基腰果酚。

2.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述甜菜堿濃度為20~50g/L。

3.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述腰果酚與混合溶液的固液比為50~125g/L。

4.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述pH值在6.8~8.9之間。

5.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述反應溫度在28-35 ℃，反應時間不低于7小時。

6.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液濃度為0.08~0.12 M，pH為7。

7.根據權利要求1所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述重組甲基轉移酶是把菌株用離心機離心，用磷酸鹽緩沖液重懸菌體，超聲破碎后所得。

8.根據權利要求7所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述菌株是經過優化甲基轉移酶OMT3原始基因序列，得到OMT3基因序列，對其進行目的基因全合成后，連接到pET28a(+)上，得到載體pET28a-OMT3，將載體pET28a-OMT3轉化到菌株BL21(DE3)中，挑取單菌落接入到卡那霉素的LB培養基中，振蕩培養，得到種子液，種子液加入發酵培養基中后，添加IPTG，培養所得。

9.根據權利要求8所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述LB培養基包括蛋白胨、酵母提取物、NaCl、去離子水。

10.根據權利要求8所述的一種酶催化甲基腰果酚的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基包括蛋白胨、酵母提取物、甘油、KH₂PO₄、K₂HPO₄、去離子水。