[發明專利]一種提高刺梨蛋白抑菌活性和熱穩定性的方法和應用

在審

• 申請號: 202210174378.8
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114456246A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 柯李晶;余兆碩;羅思浩;高浩杰;楊祎;張懿嘉;孟祥宇;黃宗克
• 申請（專利權）人: 瀚科（浙江）生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/107;C07K1/30;A61P31/04
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明涉及天然產物領域，尤其涉及一種提高刺梨蛋白抑菌活性和熱穩定性的方法，包括以下步驟：（S.1）向刺梨汁中加入堿溶液，沉淀刺梨汁中的刺梨蛋白，并對刺梨蛋白進行透析處理；（S.2）對刺梨蛋白進行分級沉降，篩選抑菌活性最強的刺梨蛋白組分；（S.3）步驟（S.2）中的蛋白組分中加入糖類化合物，通過美拉德反應對刺梨蛋白進行糖基化修飾，得到上所述糖基化刺梨蛋白。本發明通過在刺梨蛋白上糖基化反應連接糖類化合物，能夠有效提升刺梨蛋白的抑菌表現，同時還能夠使得其熱穩定性能有效提升，此外整體方法較為簡單有效且條件溫和，為替代傳統抗生素提供了良好的可能性，因而具有廣闊的應用前景和經濟價值。

技術領域

本發明涉及天然產物領域，尤其涉及一種提高刺梨蛋白抑菌活性和熱穩定性的方法和應用。

背景技術

當前，細菌的耐藥性已經成為當今無法忽視的一個重要課題。曾經一度使用的化學合成抗生素已無法滿足目前醫療治療目的，因此天然高效的抑菌成分已經成為研究開發的熱點之一。

刺梨（Roxburgh，Rosa Roxburghii Tratt），又稱繅絲花、刺蘑、山刺梨等，是中國特有的一種水果，果實呈扁球形或圓錐形，稀紡錘形，直徑2~4厘米。表面黃褐色，密被針刺，有的并具褐色斑點。

刺梨中含有營養豐富，其中含有天然的蛋白成分具有一定的抑菌作用，這些刺梨天然蛋白表現出了替代抗生素作為新一代植物抑菌肽的重要前景，但是這種抑菌作用效果仍有待進一步加強。此外，由于植物來源蛋白質熱穩定性較差，導致其無法達到抑菌藥物的標準，嚴重限制了刺梨蛋白被開發作為植物抗菌材料的前景。

發明內容

本發明是為了現有技術中的刺梨蛋白的抑菌活性較弱，同時其熱穩定性較差的缺陷，提供了一種提高刺梨蛋白抑菌活性和熱穩定性的方法和應用。

因此，本發明第一個目的在于提供了一種糖基化刺梨蛋白，

包括刺梨蛋白，所述刺梨蛋白上糖基化反應連接有糖類化合物。

針對現有技術中的刺梨粗提物（刺梨汁）抑菌效果較差的缺陷，目前一些研究人員發現，通過將刺梨蛋白進行單獨提取純化能夠有效提升其抑菌殺菌效果。但是，由于刺梨蛋白其熱穩定性較差，導致其無法達到抑菌藥物的標準。對此，本發明研究人員偶然發現，通過將刺梨中的刺梨蛋白進行糖基化修飾，從而將糖類化合物引入到至刺梨蛋白上后，能夠有效提升刺梨蛋白的殺菌抑菌效果，同時隨著糖基化改性的繼續，使得其熱穩定性能能夠有效提升。相比未糖基化反應蛋白，糖基化刺梨蛋白的抑菌活性能夠升高10~40%，最高抑菌活性超過85%，并且糖基化刺梨蛋白在75℃溫度處理下仍保持有60%以上的抑菌活性。

作為優選，所述糖類化合物包括單糖、多糖或者單糖與多糖的復合物中的任意一種。

本發明對用于引入到刺梨蛋白上的糖類化合物沒有明確的限制，經過研發人員發現，無論是單糖、多糖或者由單糖與多糖的復合物均可用以提升刺梨蛋白的熱穩定性以及抑菌性能。

作為優選，所述糖類化合物包括葡萄糖、果糖、香菇多糖、海藻多糖、葡聚糖、番石榴多糖中的任意一種或多種的復合物。

本發明的第二個發明目的在于提供了一種提高刺梨蛋白抑菌活性和熱穩定性的方法，

其包括以下步驟：

（S.1）向刺梨汁中加入堿溶液，沉淀刺梨汁中的刺梨蛋白，并對刺梨蛋白進行透析處理；

（S.2）對刺梨蛋白進行分級沉降，篩選抑菌活性最強的刺梨蛋白組分；

（S.3）步驟（S.2）中的蛋白組分中加入糖類化合物，通過美拉德反應對刺梨蛋白進行糖基化修飾，得到上所述糖基化刺梨蛋白。