[發(fā)明專利]一種靶向GPC3嵌合抗原受體T細胞及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210168410.1
• 申請日: 2022-02-23
• 公開（公告）號: CN114853893A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設計）人: 許元劍;郭志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 南京藍盾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;C07K19/00;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/00;A61K47/68;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;馬莉華

本發(fā)明提供了一種靶向GPC3嵌合抗原受體T細胞(CAR?T)及其應用。本發(fā)明通過篩選得到靶向GPC3的scFV重鏈和輕鏈作為CAR的結(jié)構(gòu)，具有高親和力和高特異性，能夠很好的浸潤至實體腫瘤內(nèi)部，在動物體內(nèi)發(fā)揮優(yōu)異的抑瘤效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細胞免疫治療領(lǐng)域。具體地，涉及一種靶向GPC3嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)及其應用。

背景技術(shù)

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T cell)的概念最早由以色列科學家ZeligEshhar在1989發(fā)表的PNAS文章中提出，包括抗原結(jié)合區(qū)、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號組成，經(jīng)歷了幾代結(jié)構(gòu)的發(fā)展和優(yōu)化。2017年全球首款CAR-T產(chǎn)品Kymriah獲得FDA批準震撼上市，用于兒童和年輕成年患者急性淋巴細胞性白血病(ALL)。截止目前有多款靶向CD19或BCMA的CAR-T產(chǎn)品已在多個國家或地區(qū)獲得上市，而且都達到了驚人的治療效果；然而，這些產(chǎn)品都是針對血液腫瘤的，目前針對實體腫瘤還未有一款CAR-T產(chǎn)品獲批準上市，大多數(shù)的實體腫瘤CAR-T臨床結(jié)果，也沒有血液腫瘤那么耀眼。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)蛋白是一種細胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，在嬰兒期的一些組織中，特別是肝臟和腎臟中表達，是與器官形成相關(guān)的胞外基質(zhì)蛋白；在成人組織中幾乎觀察不到GPC3的表達，但是在肝細胞癌、黑素瘤、卵巢透明細胞癌、肺鱗狀細胞癌等各種癌組織中高表達。因此GPC3是一種很好的腫瘤治療靶點。

因此，本領(lǐng)域亟待開發(fā)一種針對實體腫瘤的、靶向GPC3嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靶向GPC3嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)及其應用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種靶向GPC3的單鏈可變片段(scFv)，所述單鏈可變片段包含重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL，所述重鏈可變區(qū)包括以下三個互補決定區(qū)CDR：

SEQ ID NO.18所示的HCDR1，

SEQ ID NO.19所示的HCDR2，和

SEQ ID NO.20所示的HCDR3；和/或

所述輕鏈可變區(qū)包括以下三個互補決定區(qū)CDR：

SEQ ID NO.21所示的LCDR1，

SEQ ID NO.22所示的LCDR2，和

SEQ ID NO.23所示的LCDR3。

在另一優(yōu)選例中，所述單鏈可變片段包含SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的VH和SEQID NO：7所示氨基酸序列的VL。

在另一優(yōu)選例中，所述的scFv包含VH和VL之間的接頭。

在另一優(yōu)選例中，所述的scFv的結(jié)構(gòu)如下式a或b所示：

V_L-V_H (a)；

V_H-V_L (b)

其中，V_H為抗體重鏈可變區(qū)；V_L為抗體輕鏈可變區(qū)；“-”為連接肽或肽鍵。

在另一優(yōu)選例中，所述的接頭為柔性接頭，較佳地，所述接頭為(G4S)n，中n為1-4，較佳地n為2-4，更佳地n為3。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種嵌合抗原受體(CAR)融合蛋白，其從N末端到C末端包含：

(i)本發(fā)明的第一方面所述的scFv，

(ii)跨膜結(jié)構(gòu)域，