[發明專利]基于聚焦技術的單分子檢測方法在審
| 申請號： | 202210165399.3 | 申請日： | 2022-02-23 |
| 公開（公告）號： | CN114235772A | 公開（公告）日： | 2022-03-25 |
| 發明（設計）人： | 王旭東;王帥超;馮一鳴;呂全超;張漢君;李萌萌;干作飛;顧海濤 | 申請（專利權）人： | 北京吉天儀器有限公司;杭州聚拓生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N21/53;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100015 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 聚焦 技術 分子 檢測 方法 | ||
1.基于聚焦技術的單分子檢測方法，所述基于聚焦技術的單分子檢測方法為：
磁珠與待測樣品完成免疫反應，之后在非牛頓溶液中重懸，
重懸后的磁珠通入毛細管，在所述毛細管內的流體流動中，所述磁珠聚焦在所述毛細管的中心軸線；
光源發出的檢測光照射毛細管內依次通過的每個磁珠，獲得與每個磁珠對應的前散射光信號和熒光信號，根據所述前散射信號獲得磁珠數量，根據所述熒光信號獲得與磁珠對應的熒光強度Ai，i=1,2···N；
根據所述磁珠數量和熒光強度Ai得到陽性磁珠比例f；
比較所述比例f和閾值；
若所述比例f小于所述閾值，選擇并利用數字檢測方法得出待測樣品濃度；
若所述比例f不小于所述閾值，選擇并利用模擬檢測方法得出待測樣品濃度。
2.根據權利要求1所述的基于聚焦技術的單分子檢測方法，其特征在于，所述模擬檢測方法為：
根據磁珠熒光強度分布，做單峰擬合，得到峰中心位置；
根據峰中心位置以及映射關系得到待測樣品濃度，所述映射關系是峰中心位置與樣品濃度間的對應關系。
3.根據權利要求2所述的基于聚焦技術的單分子檢測方法，其特征在于，所述映射關系的獲得方式為：
磁珠與不同濃度的標準樣品完成免疫反應，之后在非牛頓溶液中重懸，
重懸后的磁珠通入毛細管，在所述毛細管內的流體流動中，所述磁珠聚焦在所述毛細管的中心軸線；
光源發出的檢測光照射毛細管內依次通過的每個磁珠，獲得與每個磁珠對應的前散射光信號和熒光信號，根據所述前散射信號獲得磁珠數量，根據所述熒光信號獲得與磁珠對應的熒光強度Ai，i=1,2···N；
根據各個標準樣品的磁珠熒光強度分布，做單峰高斯擬合，得到峰中心位置；
根據各個標準樣品的濃度及峰中心位置建立峰中心位置與樣品濃度的對應關系。
4.根據權利要求1所述的基于聚焦技術的單分子檢測方法，其特征在于，所述免疫反應為：
具有捕獲抗體的磁珠捕獲抗原，再與帶有熒光或酶標記的檢測抗體結合 。
5.根據權利要求1所述的基于聚焦技術的單分子檢測方法，其特征在于，所述閾值等于0.7。
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