[發(fā)明專利]一種檢測(cè)血液中p-tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210163756.2
• 申請(qǐng)日: 2022-02-22
• 公開（公告）號(hào): CN115015228A
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建芳;施維;杜為林;林杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海科華生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76;G01N33/535;G01N33/68
• 代理公司: 上海世圓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31320
• 代理人: 許俊東

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)血液中p?tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括：鏈霉親和素包被的磁微粒、生物素標(biāo)記的p?tau181抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記的p?tau181抗體、p?tau181定標(biāo)品。另外，本發(fā)明還公開了一種檢測(cè)血液中p?tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法。本發(fā)明所述試劑盒具有反應(yīng)時(shí)間短，操作方便，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種生物診斷試劑，具體來說是一種檢測(cè)血液中p-tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

2018年國(guó)際阿爾茲海默病協(xié)會(huì)發(fā)布的報(bào)告指出，全球有將近5000萬(wàn)的癡呆患者。癡呆的治療目前尚無(wú)特效藥物，早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)從而減慢癡呆進(jìn)程具有重要臨床意義。

AD典型的病理特征為老年斑的形成及神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)，神經(jīng)元或軸突的凋亡造成神經(jīng)纖維纏結(jié)。生物學(xué)上，阿爾茲海默癥患者神經(jīng)元或軸突的凋亡是由于tau蛋白磷酸化造成的，因此磷酸化的tau蛋白直接與神經(jīng)元或軸突的變性相關(guān)。Juan Lantero-Rodriguez等人報(bào)道，磷酸化的tau蛋白指標(biāo)，例如p-tau181，p-tau217和p-tau231，不僅能在腦脊液和血清中檢出，而且這些指標(biāo)在AD的早期階段就開始升高。同時(shí)Che-Chuan Yang等人報(bào)道，p-Tau181 水平與早期 AD 病人疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)，正常組和阿爾茲海默癥組完全不同，利用p-Tau181提高了AD診斷的靈敏度和特異性。Xue Wu等人利用SIMOA平臺(tái)，對(duì)中國(guó)阿爾茲海默病患者血漿中的指標(biāo)（p-tau181，Aβ42，Aβ40等）進(jìn)行檢測(cè)，證實(shí)了p-tau181在區(qū)分AD患者和正常人群比其他指標(biāo)更具有診斷價(jià)值。

目前正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像(positron emission tomography，PET)和檢測(cè)腦脊液中的標(biāo)志物，成為診斷AD常用的技術(shù)手段。血液中AD標(biāo)志物的含量要遠(yuǎn)低于腦脊液中的含量，所以在血液中檢測(cè)AD標(biāo)志物需要更靈敏的檢測(cè)方法。血液中標(biāo)志物的檢測(cè)也有使用SIMOA單分子檢測(cè)平臺(tái)和Merck SMCxPRO單分子免疫檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)。然而腦脊液的檢查是一種有創(chuàng)檢查，其他平臺(tái)的檢測(cè)費(fèi)用高，操作復(fù)雜，限制了這些方法的大規(guī)模使用。由此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種檢測(cè)成本低，取樣簡(jiǎn)單，靈敏度高，可以定量，操作簡(jiǎn)單和快速檢測(cè)血液中p-tau181的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)血液中p-tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法，所述的這種檢測(cè)血液中p-tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中在血液中檢測(cè)AD標(biāo)志物的靈敏度不高的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)血液中p-tau181蛋白的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括：鏈霉親和素包被的磁微粒、生物素標(biāo)記的p-tau181抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記的p-tau181抗體、p-tau181定標(biāo)品。

進(jìn)一步的，所述的血液為血清或血漿。

進(jìn)一步的，所述的鏈霉親和素包被的磁微粒為甲苯磺酰基磁微粒、羧基磁微粒或者醛基磁微粒中的任意一種，粒徑為0.5-3um。

進(jìn)一步的，所述的生物素標(biāo)記的p-tau181抗體為識(shí)別p-tau181蛋白的單抗。

進(jìn)一步的，所述的堿性磷酸酶標(biāo)記的p-tau181抗體為識(shí)別p-tau181蛋白的單抗。

進(jìn)一步的，所述的p-tau181定標(biāo)品為用定標(biāo)品緩沖液將p-tau181抗原配制成一系列濃度。

本發(fā)明還提供了上述的試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1）鏈霉親和素包被磁珠的制備：