[發(fā)明專利]一種組織-細(xì)胞-細(xì)胞器三級(jí)靶向的仿生制劑及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210161929.7
• 申請(qǐng)日: 2022-02-22
• 公開（公告）號(hào): CN115177739A
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷光華;鄧彩鳳;曾超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K47/64
• 分類號(hào): A61K47/64;A61K47/69;A61K31/203;A61P29/00;A61P19/02;C12N5/078;C07K7/06
• 代理公司: 長(zhǎng)沙朕揚(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 郭蓓霏

1.一種組織-細(xì)胞-細(xì)胞器三級(jí)靶向的仿生制劑，其特征在于，包括載生物活性物質(zhì)的納米顆粒和覆蓋在所述納米顆粒表面的經(jīng)高爾基體靶向肽修飾的活化血小板膜，所述納米顆粒為聚合物納米顆粒或脂質(zhì)體，所述高爾基體靶向肽包含氨基酸序列SXYQRL，其中X代表任意氨基酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織-細(xì)胞-細(xì)胞器三級(jí)靶向的仿生制劑，其特征在于，所述活化血小板膜為經(jīng)血小板活化劑激活后所得的血小板膜或血小板微粒膜；所述聚合物納米顆粒為PLGA納米粒；所述生物活性物質(zhì)為高爾基體干擾劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織-細(xì)胞-細(xì)胞器三級(jí)靶向的仿生制劑，其特征在于，所述高爾基體干擾劑為全反式維甲酸及其衍生物。

4.一種如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述組織-細(xì)胞-細(xì)胞器三級(jí)靶向的仿生制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將經(jīng)過(guò)N-羥基琥珀酰亞胺活化的高爾基體靶向肽與活化血小板膜共同孵育，得到經(jīng)高爾基體靶向肽修飾的活化血小板膜；

(2)制備載生物活性物質(zhì)的聚合物納米顆粒混懸液或脂質(zhì)體液；

(3)將所述經(jīng)高爾基體靶向肽修飾的活化血小板膜和所述聚合物納米顆粒混懸液或脂質(zhì)體液共同孵育，然后通過(guò)超聲或擠壓過(guò)微孔濾膜的方式制成仿生制劑，即得。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述活化血小板膜由以下方法制備得到：通過(guò)梯度離心制得血小板，然后加入血小板激活劑，孵育4-8h后，離心，取富含血小板微粒的上層液，通過(guò)反復(fù)凍融、梯度離心，除去血小板微粒內(nèi)容物，即得；所述血小板激活劑為脂多糖、凝血酶、膠原、含鈣離子試劑中的一種或多種；所述共同孵育時(shí)間為2-6h，未反應(yīng)的高爾基體靶向肽通過(guò)超濾除去。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述活化血小板膜由以下方法制備得到：通過(guò)梯度離心制得血小板，然后加入血小板激活劑，孵育4-8h后，通過(guò)反復(fù)凍融、梯度離心，除去血小板內(nèi)容物，即得；所述血小板激活劑為脂多糖、凝血酶、膠原、含鈣離子試劑中的一種或多種；所述共同孵育時(shí)間為2-6h，未反應(yīng)的高爾基體靶向肽通過(guò)超濾除去。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述聚合物納米顆粒混懸液由以下方法制備得到：將聚合物材料和生物活性物質(zhì)溶于二氯甲烷中，得有機(jī)相；另外以質(zhì)量-體積濃度為1％的PVA水溶液為水相，將所述有機(jī)相加入到水相中，有機(jī)相與水相的體積比例為1:5-20，進(jìn)行200-400W的探頭超聲5-15min，即得聚合物納米顆粒混懸液。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述脂質(zhì)體液由以下方法制備得到：將磷脂、膽固醇以及生物活性物質(zhì)溶解于乙醇中，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去有機(jī)試劑，然后加入水脫膜，進(jìn)行200-400W的探頭超聲5-15min，即得脂質(zhì)體液。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述共同孵育的具體操作包括如下步驟：將所述經(jīng)高爾基體靶向肽修飾的活化血小板膜和所述聚合物納米顆粒混懸液或脂質(zhì)體液混合得到混合液，將所述混合液在冰水浴中進(jìn)行200-400W探頭超聲處理5-15min；或?qū)⑺龌旌弦阂来螖D壓通過(guò)直徑為400nm、200nm、100nm的微孔濾膜。

10.一種如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的仿生制劑或由權(quán)利要求4-9所述制備方法制備得到的仿生制劑在制備防治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。