[發明專利]一種異亮氨酸生產方法、乙酰羥酸合酶突變體及重組微生物與應用在審
| 申請號： | 202210157056.2 | 申請日： | 2022-02-21 |
| 公開（公告）號： | CN116656754A | 公開（公告）日： | 2023-08-29 |
| 發明（設計）人： | 吳濤;薛婷莉;姚嘉琪;欒明月;胡丹;趙津津;李巖 | 申請（專利權）人： | 廊坊梅花生物技術開發有限公司 |
| 主分類號： | C12P13/06 | 分類號： | C12P13/06;C12N9/88;C12N15/60;C12N1/21;C12N15/77;C12P13/08;C12R1/15 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 孫怡 |
| 地址： | 065001 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 異亮氨酸 生產 方法 乙酰 羥酸合酶 突變體 重組 微生物 應用 | ||
1.一種異亮氨酸生產方法，其特征在于，包括以重組微生物進行發酵培養的步驟，所述重組微生物相比于出發菌株，表達乙酰羥酸合酶ilvIH或乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134L、ilvHF134V或ilvHF134A；所述重組微生物的出發菌株為棒桿菌；
乙酰羥酸合酶ilvIH的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.21所示，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134L的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.22，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134V的氨基酸序列如SEQ?IDNO.23所示，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134A的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.24所示。
2.根據權利要求1所述的異亮氨酸生產方法，其特征在于，乙酰羥酸合酶ilvIH的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.17所示，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134L的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.18，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134V的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示，乙酰羥酸合酶突變體ilvHF134A的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.20所示。
3.根據權利要求1或2所述的異亮氨酸生產方法，其特征在于，所述出發菌株為谷氨酸棒桿菌、北京棒桿菌或黃色短桿菌。
4.一種乙酰羥酸合酶突變體，其特征在于，以大腸桿菌野生型乙酰羥酸合酶的氨基酸序列為參考序列，所述乙酰羥酸合酶突變體含有第134位亮氨酸、纈氨酸或丙氨酸取代的突變。
5.根據權利要求4所述的乙酰羥酸合酶突變體，其特征在于，具有如SEQ?ID?NO.22-24任一所示的氨基酸序列。
6.編碼權利要求4或5所述的乙酰羥酸合酶突變體的核酸。
7.根據權利要求6所述的核酸，其特征在于，具有如SEQ?ID?NO.18-20任一所示的核苷酸序列。
8.含有權利要求6或7所述的核酸的生物材料，所述生物材料為表達盒、載體或宿主細胞。
9.一種重組微生物，其特征在于，所述重組微生物表達乙酰羥酸合酶ilvIH或乙酰羥酸合酶突變體，所述乙酰羥酸合酶ilvIH如權利要求1或2所述，所述乙酰羥酸合酶突變體如權利要求4或5所述；所述重組微生物的出發菌株為棒桿菌；
優選，編碼所述乙酰羥酸合酶突變體的核酸具有如SEQ?ID?NO.18-20任一所示的核苷酸序列；
和/或，所述重組微生物的出發菌株為谷氨酸棒桿菌、北京棒桿菌或黃色短桿菌。
10.權利要求4或5所述的乙酰羥酸合酶突變體，或權利要求6或7所述的核酸，或權利要求8所述的生物材料，或權利要求9所述的重組微生物的如下任一種應用：
(1)在發酵生產纈氨酸、亮氨酸和/或異亮氨酸及其衍生物中的應用；
(2)在用于生產纈氨酸、亮氨酸和/或異亮氨酸及其衍生物的微生物遺傳育種中的應用；
(3)在提高發酵生產異亮氨酸及其衍生物產量上的應用。
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