[發明專利]一種可降解dsRNA納米載體的制備方法

在審

• 申請號: 202210156608.8
• 申請日: 2022-02-21
• 公開（公告）號: CN115057951A
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 楊光;畢飛虎;衛含晨;任慧;李鴻宇;韋曾明;于得水;黃勃
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C08B37/16
• 分類號: C08B37/16;C12N15/87
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 丁瑞瑞

本發明涉及農藥納米載體技術領域，具體來說是一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，包括：(1)β?環糊精、三苯基膦、碘制備CDI；(2)CDI、對羥基苯甲醛、碳酸鉀制備CDCHO；(3)CDCHO、三乙胺、6?溴己酰氯制備CDBr；(4)CDBr、疊氮化鈉、四丁基碘化銨制備CDN₃；(5)CDN₃、溴化銅、五甲基二乙烯三胺、炔基化甘露糖、銅絲制備CDMan，(6)CDMan、Rh、硼氫化鈉制備Man?Rh；(7)構建Man?Rh組裝體。本申請在β?環糊精外側羥基上修飾醛基，內腔羥基上修飾疊氮基團，炔基化甘露糖與疊氮基團click點擊反應將親水性甘露糖接到β?環糊精上，修飾上Rh后形成的亞胺用硼氫化鈉還原得到兩親性高分子Man?Rh，以此構建的Man?Rh組裝體為可降解dsRNA納米載體，具有良好的生物相容性，進入目標細胞內可及時有效地將dsRNA釋放。

技術領域

本發明涉及農藥納米載體技術領域，具體來說是一種可降解dsRNA納米載體的制備方法。

背景技術

傳統化學農藥由于利用效率低，它的過度使用嚴重威脅著生態系統和人類健康。RNA干擾(RNAi)作為一種新興的技術被認為有望取代傳統化學農藥，但是由于其自 身的特性導致雙鏈RNA(dsRNA)易被酶解且難以穿透細胞膜，因此開發和利用功能 性納米載體對dsRNA進行運載、保護和靶向釋放來提高RNAi效率效果是當前納米農 藥領域發展的重要研究方向。

目前，Laisney等(ACS Appl.Mater.Interfaces 2020,12,23,25645–25657)通過納米 材料運載dsRNA實現在草地貪夜蛾Sf9細胞中的RNAi，以草地貪夜蛾Sf9穩定細胞株(Sf 9_LUC)熒光素酶基因的RNA干擾(RNAi)為模型系統，研究了與不同納米系統(聚 L-精氨酸和聚L-精氨酸功能化的金納米粒子)結合的dsRNA和裸露dsRNA進入細胞能 力的比較，結果表明，與未結合的納米系統相比，結合到不同納米系統的dsRNA具有 良好的進入細胞的能力。但納米載體運載dsRNA進入目標細胞內如何及時有效地將 dsRNA釋放的問題仍未被很好的解決。

本項目的研究目標內容為：合成可降解的新型兩親性高分子，并以此為基礎構建一 種新型的具有ATP響應性的可降解dsRNA納米載體。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于如何制備可降解dsRNA納米載體，使納米載體運載dsRNA進入目標細胞內可及時有效地將dsRNA釋放。

本發明通過以下技術手段實現解決上述技術問題的：

一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備CDI：稱取β-環糊精、三苯基膦和碘備用，先用溶劑溶解三苯基膦，再 將碘緩慢加入到上述溶液中，然后在65～75℃下加入β-環糊精，在氮氣的保護下反應 22～24小時后，冰水浴下加入甲醇鈉，過濾洗滌干燥固體得到CDI；

(2)制備CDCHO：先用溶劑溶解CDI，再加入對羥基苯甲醛和催化劑，并在75～85℃下反應22～24h，然后在甲醇中沉降，過濾、洗滌、干燥固體得到CDCHO；

(3)制備CDBr：分別將CDCHO和催化劑溶解在溶劑中，6-溴己酰氯溶解在溶劑 中，再將6-溴己酰氯溶液緩慢滴入CDCHO和催化劑的混合溶液中，然后在45～55℃反 應18～20小時，純化后得到CDBr；

(4)制備CDN₃：分別稱取CDBr和疊氮化鈉溶于溶劑中，加入催化劑，在55～65℃ 下反應22～24h，純化后得到CDN₃；

(5)制備CDMan：分別稱取CDN₃、二價銅、催化劑和炔基化甘露糖溶在溶劑中， 向溶液中加入零價銅，在氮氣保護下，55～65℃反應12～14小時，后處理得到CDMan；