[發明專利]一種可降解dsRNA納米載體的制備方法

在審

• 申請號: 202210156608.8
• 申請日: 2022-02-21
• 公開（公告）號: CN115057951A
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 楊光;畢飛虎;衛含晨;任慧;李鴻宇;韋曾明;于得水;黃勃
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C08B37/16
• 分類號: C08B37/16;C12N15/87
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 丁瑞瑞

1.一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)制備CDI：稱取β-環糊精、三苯基膦和碘備用，先用溶劑溶解三苯基膦，再將碘緩慢加入到上述溶液中，然后在65～75℃下加入β-環糊精，在氮氣的保護下反應22～24小時后，冰水浴下加入甲醇鈉，過濾洗滌干燥固體得到CDI；

(2)制備CDCHO：先用溶劑溶解CDI，再加入對羥基苯甲醛和催化劑，并在75～85℃下反應22～24h，然后在甲醇中沉降，過濾、洗滌、干燥固體得到CDCHO；

(3)制備CDBr：分別將CDCHO和催化劑溶解在溶劑中，6-溴己酰氯溶解在溶劑中，再將6-溴己酰氯溶液緩慢滴入CDCHO和催化劑的混合溶液中，然后在45～55℃反應18～20小時，純化后得到CDBr；

(4)制備CDN₃：分別稱取CDBr和疊氮化鈉溶于溶劑中，加入催化劑，在55～65℃下反應22～24h，純化后得到CDN₃；

(5)制備CDMan：分別稱取CDN₃、二價銅、催化劑和炔基化甘露糖溶在溶劑中，向溶液中加入零價銅，在氮氣保護下，55～65℃反應22～24小時，后處理得到CDMan；

(6)制備Man-Rh：稱取CDMan用溶劑溶解，稱取Rh(酰胺化羅丹明B)用乙醇溶解，兩種溶液混合后室溫反應1.5～2.5小時，加入還原劑后處理得到Man-Rh；

(7)構建Man-Rh組裝體：稱取Man-Rh溶于共溶劑中，向溶液中加入水，后處理得到Man-Rh組裝體。

2.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟1中的β-環糊精、三苯基膦、碘的當量重量比為1：12～14：13～16；所述步驟1～6中的溶劑選用N,N-二甲基甲酰胺。

3.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟2中的催化劑選用碳酸鉀，且CDI、對羥基苯甲醛、碳酸鉀的當量重量比為1：10～15：6～8。

4.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟3中的催化劑選用三乙胺，且CDCHO、三乙胺、6-溴己酰氯的當量重量比為1：18～20：24～30。

5.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟4中的催化劑選用四丁基碘化銨，且CDBr、四丁基碘化銨、疊氮化鈉的當量重量比為1：0.1～0.2：45～50。

6.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟3和步驟4中的純化方法采用柱層析法，采用乙酸乙酯和石油醚為溶劑，且乙酸乙酯、石油醚體積比為1：1-10。

7.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟5中的二價銅選用溴化銅、零價銅選用銅絲、催化劑選用五甲基二乙烯三胺；且CDN₃、溴化銅、五甲基二乙烯三胺、炔基化甘露糖的當量重量比為1：5～6：40～45：20～28；所述后處理方法為減壓除去溶劑，再經透析、凍干得到CDMan。

8.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟6中Rh的制備方法為：分別稱取1當量重的羅丹明和10～20當量重的二乙烯三胺；將羅丹明和二乙烯三胺用乙醇溶解后，70℃回流反應24小時后處理得到Rh。

9.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟6中的溶劑選用N,N-二甲基甲酰胺、還原劑選用硼氫化鈉；且CDMan與Rh當量重量比為1：14～21，N,N-二甲基甲酰胺與乙醇的體積比2～3:1。

10.根據權利要求1所述的一種可降解dsRNA納米載體的制備方法，其特征在于：所述步驟7中的共溶劑選用DMSO(二甲基亞砜)。