[發(fā)明專利]一種快速準確無創(chuàng)的鴯鹋雛鳥性別鑒定方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210156093.1 | 申請日： | 2022-02-21 |
| 公開（公告）號： | CN114292926B | 公開（公告）日： | 2023-09-22 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張曉愛;于躍江;曹婉怡;陳莊;張鐵軍;魏文康;彭長祿;王志林 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心;廣東新基鴯鹋實業(yè)有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京眾達德權(quán)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11570 | 代理人： | 張曉冬 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 準確 鴯鹋 雛鳥 性別 鑒定 方法 | ||
本發(fā)明提供一種快速準確無創(chuàng)的鴯鹋雛鳥性別鑒定方法，涉及雛鳥性別鑒定技術領域，包括鴯鹋羽毛采樣、DNA提取、引物設計、PCR反應、瓊脂糖電泳進行鴯鹋性別鑒定步驟。本發(fā)明，通過分析最新公布的鴯鹋基因組中Z與W染色體序列差異，設計了一組性別鑒定引物，通過PCR和電泳來鑒定鴯鹋的性別，用于鑒定的樣本是少量的羽毛、而非血液和肉，所以對鴯鹋沒有傷害，同時也減少了在抓捕取樣過程鴯鹋對人的攻擊，是一種無創(chuàng)鑒定技，通過優(yōu)化基因組DNA提取方法和PCR退火溫度，實現(xiàn)了羽毛中微量DNA的提取和PCR擴增，性別鑒定引物的特異性好，用于性別鑒定的電泳條帶清晰明亮，是一種準確可靠的鑒定技術。
技術領域
本發(fā)明涉及雛鳥性別鑒定技術領域，尤其涉及一種快速準確無創(chuàng)的鴯鹋雛鳥性別鑒定方法。
背景技術
鴯鹋（學名：Dromaius?novaehollandia）又名澳洲鴕鳥，體型僅次于非洲鴕鳥。鴯鹋作為一種珍禽，因具有重要的經(jīng)濟價值在世界各國被廣泛地養(yǎng)殖。鴯鹋具有很高的營養(yǎng)價值，含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素，血紅素鐵和肌酸；脂肪、膽固醇的含量較低。鴯鹋油含有大量的多不飽和脂肪酸和抗氧化劑，具有強效的抗炎、降膽固醇和透皮促滲等功效。鴯鹋因其營養(yǎng)價值和藥用價值而備受關注，被引入世界各國大量養(yǎng)殖。
鴯鹋是雌雄同態(tài)鳥，16月齡內(nèi)的鴯鹋很難通過外觀等特征進行性別判定。鴯鹋性別鑒定能幫助飼養(yǎng)人員按照不同性別的需求提供更適合的管理和喂養(yǎng)。鴯鹋生長周期長、飼養(yǎng)成本高，性別鑒定可以縮短非目的性別個體的飼養(yǎng)時間，從而節(jié)省大量飼養(yǎng)成本。隨著基因組測序和核酸檢測技術的發(fā)展，PCR等分子檢測技術為鴯鹋性別早期快速鑒定提供了工具。鴯鹋的性別由性染色體的組合決定，雄性鴯鹋包含兩條Z染色體，為ZZ型；雌性鴯鹋包含Z和W染色體各1條，為ZW型，W染色體為雌性鴯鹋所特有，通過檢測Z染色和W染色體的序列差異可以鑒定鴯鹋的性別。
現(xiàn)有的通過檢測Z染色和W染色體的序列差異鑒定鴯鹋的性別的檢測方法大多是通過檢測鴯鹋的血液和肉進行檢測，這種方法會對鴯鹋造成傷害，同時在獲取檢測樣本時容易造成鴯鹋對人的攻擊，容易使得工作人員受傷。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術中存在的缺點，而提出的一種快速準確無創(chuàng)的鴯鹋雛鳥性別鑒定方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術方案：一種快速準確無創(chuàng)的鴯鹋雛鳥性別鑒定方法，包括以下步驟：
S1：在鴯鹋養(yǎng)殖場對鴯鹋雛鳥佩戴好標有編號的腳環(huán)標記，然后對進行采樣，采取幼鳥背部和尾部羽毛5根，放入低溫冷藏盒送往檢測的實驗室；
S2：將2根羽毛的根部0.5cm處剪下，然后剪碎放入裝有180μl組織裂解液TL的1.5ml離心管中，加入20μl的蛋白酶K(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻，從而得到裂解物；
S3：將裂解物放置在55℃水浴過夜直到組織消化完全，然后加入200μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘，待其自然冷卻后加入100μl異丙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，得到混合物；
S4：用1ml的槍頭吸取混合物，將混合物加入一個吸附柱AC中，將吸附柱放入收集管中以13000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液，加入200μl抑制物去除液IR，以12000rpm離心30秒，倒掉廢液，加入700μl漂洗液WB，以12000rpm離心30秒，倒掉廢液，加入500μl漂洗液WB，以12000rpm離心30秒，倒掉廢液；
S5：將吸附柱AC放回空收集管中，以13000rpm離心2分鐘，去除漂洗液，然后取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加50μl洗脫緩沖液EB，室溫放置3-5分鐘；
S6：然后以12,000rpm離心1分鐘，然后丟棄吸附柱AC，保留含DNA溶液的收集管，用核酸蛋白測定儀對?DNA進行濃度測定，從而得到提取的基因組DNA，對提取的基因組DNA進行包保存；
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于廣東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心;廣東新基鴯鹋實業(yè)有限公司，未經(jīng)廣東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心;廣東新基鴯鹋實業(yè)有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202210156093.1/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 上一篇：一種中藥飲片生產(chǎn)用均勻研磨裝置
- 下一篇：一種紡織面料封邊方法
