[發(fā)明專利]基于雙功能融合蛋白的真菌毒素磁化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210155141.5
• 申請(qǐng)日: 2022-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN114594262B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王松雪;劉洪美;葉金;倪保霞;陳金男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/543;G01N33/53;C07K19/00;C12N9/16;C12N15/70;C12N15/62
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發(fā)明公開了一種基于雙功能融合蛋白的真菌毒素磁化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其應(yīng)用。該試劑盒包括鏈霉親和素磁微粒、生物素標(biāo)記的真菌毒素抗原、真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液、真菌毒素納米抗體?堿性磷酸酶雙功能融合蛋白、樣本稀釋液、洗滌液、底物液。本發(fā)明試劑盒將化學(xué)發(fā)光、磁微粒分離和基因工程技術(shù)匯聚在一起，可實(shí)現(xiàn)真菌毒素的快速、準(zhǔn)確、全自動(dòng)化檢測(cè)，食用油可直接加樣檢測(cè)，無需提取、離心等操作，減少檢測(cè)人員的操作誤差，降低對(duì)檢測(cè)人員的能力要求，顯著提高基層大批量樣品的檢測(cè)效率，為真菌毒素檢測(cè)、監(jiān)測(cè)提供有力的手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于雙功能融合蛋白的真菌毒素磁化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

真菌毒素(Mycotoxins)是產(chǎn)毒真菌在一定環(huán)境條件下產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛污染農(nóng)產(chǎn)品、食品、中藥材及飼料等植物源性產(chǎn)品。在農(nóng)產(chǎn)品、食品和飼料中比較常見的真菌毒素有：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，又稱嘔吐毒素，DON)、黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1，AFB1)、黃曲霉毒素B2(AFB2)、黃曲霉毒素G1(AFG1)、黃曲霉毒素G2(AFG2)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)、伏馬毒素B1(fumonisin B1，F(xiàn)B1)、伏馬毒素B2(FB1)、玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)、T-2毒素(T-2toxin)、HT-2毒素(HT-2toxin)或黃曲霉毒素M1(aflatoxin M1，AFM1)、展青霉素(patμLin)等。真菌毒素可以引起人類和動(dòng)物的急性或慢性中毒，可損害機(jī)體的肝臟、腎臟、神經(jīng)組織、造血組織及皮膚組織等，對(duì)人類和動(dòng)物健康可產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。鑒于真菌毒素的危害，世界各國對(duì)其含量進(jìn)行了嚴(yán)格的限定。開展真菌毒素殘留污染研究，開發(fā)高靈敏、低成本、可靠的自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)對(duì)保證農(nóng)產(chǎn)品、食品、中藥和飼料等的質(zhì)量和安全，打破國外的技術(shù)壁壘，保護(hù)我國在國際貿(mào)易中的經(jīng)濟(jì)利益，增加出口創(chuàng)匯具有重要意義。

目前真菌毒素的檢測(cè)方法有薄層色譜法，高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法，毛細(xì)管電泳法、液質(zhì)聯(lián)用法等。其中薄層色譜法是最早使用的檢測(cè)真菌毒素的方法，其優(yōu)點(diǎn)是適合于沒有經(jīng)過專門培訓(xùn)的人員操作，且成本低、無需價(jià)格昂貴的儀器。但是，薄層色譜法的樣品處理繁瑣，實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜，所需檢測(cè)周期較長，容易受到雜質(zhì)的干擾。測(cè)定時(shí)用目測(cè)半定量，存在主觀影響較大，靈敏度不高等缺點(diǎn)，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代檢測(cè)要求。酶聯(lián)免疫吸附法具有檢測(cè)特異性好、靈敏度高、并且檢測(cè)成本較低的優(yōu)點(diǎn)，適用于基層機(jī)構(gòu)大量樣品的篩選和普查，可以大大節(jié)省時(shí)間和費(fèi)用。酶聯(lián)免疫吸附法的主要問題是容易造成假陽性。因此，主要用于基層的篩查檢測(cè)。高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法和液質(zhì)聯(lián)用法等儀器分析方法具有準(zhǔn)確度高、靈敏性強(qiáng)、可微量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)，是目前常用的食品中毒素檢測(cè)的方法。但因其對(duì)樣品純度要求較高，需要經(jīng)過一些前處理過程，導(dǎo)致檢測(cè)成本高、周期長，無法滿足大批量樣品快速篩選的要求。磁微粒具有超順磁微粒性，在磁微粒場下具有磁微粒場響應(yīng)性，將磁微粒應(yīng)作免疫檢測(cè)的固相載體，將大大提高反應(yīng)的表面積，更容易進(jìn)行固相、液相分離，可提高檢測(cè)的靈敏度。采用微小的磁微粒作為固相可增加包被表面積，從而增加抗原或抗體的吸附量，既加快了反應(yīng)速度，也使清洗和分離更簡便。目前免疫酶標(biāo)試劑制備方式是采用化學(xué)標(biāo)記方法，如使用雙功能試劑，戊二醛，過碘酸鹽，SMCC試劑{4(N馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷1羧酸琥珀酰亞胺酯等)}，2IT試劑(亞氨基噻吩鹽酸鹽)等，將抗體與酶偶聯(lián)，但是化學(xué)偶聯(lián)方法操作復(fù)雜，偶聯(lián)效率低，由于偶聯(lián)位點(diǎn)不固定且條件劇烈，易導(dǎo)致抗體或酶活性降低，抗體與酶的結(jié)合物不均一，需要分離去除未結(jié)合的酶和抗體，且去除未結(jié)合的抗體至關(guān)重要，因?yàn)橛坞x的抗體會(huì)與酶標(biāo)記抗體競爭相應(yīng)的抗原，減低結(jié)合到固相上的酶標(biāo)抗體量，因而降低了檢測(cè)的靈敏度。

由于真菌毒素危害較大，因而尋找一種簡單、快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化的檢測(cè)方法，對(duì)于研究真菌毒素的檢測(cè)和污染控制具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種真菌毒素磁化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，該試劑盒將化學(xué)發(fā)光、磁微粒分離和基因工程技術(shù)匯聚在一起，具有良好的準(zhǔn)確性、靈敏度和重復(fù)性。