[發明專利]一種地頂孢霉的發酵工藝及培養基

在審

• 申請號: 202210155016.4
• 申請日: 2022-02-21
• 公開（公告）號: CN114437944A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 張小朋;李曉軍;黃福嵐;趙佳;余有龍;王丁相
• 申請（專利權）人: 張小朋
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/40;C12R1/645
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

本發明公開了一種地頂孢霉的發酵工藝及培養基，通過科學調配發酵培養基中各營養物質的含量，精確控制發酵工藝，不僅能夠促進地頂孢霉的生長，而且能夠顯著提高腺苷等代謝物的含量，提高了地頂孢霉培養物的使用價值。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種地頂孢霉的發酵工藝及培養基。

背景技術

地頂孢霉是一種蟲草真菌，它多是寄生于蟲草之中，能夠合成多種藥理活性物質，其菌絲體及培養物含有多類藥理活性成分，經測試，這些藥理活性成分具有體外抗腫瘤活性以及增強動物體內免疫活性的功能，因此可用于飼料添加劑及藥品和保健食品的制備。

地頂孢霉培養物是由從古尼蟲草分離的地頂孢霉菌經人工發酵而得到的產品，擁有蟲草素、蟲草酸、多糖、腺苷等與古尼蟲草相似的功能性成分，人工發酵得到的地頂孢霉培養物成本大大降低。

專利CN1259570A公開的發酵工藝中，地頂孢霉發酵周期為48-60h，發酵完成后采用超膜過濾后噴霧干燥的方法來獲取地頂孢霉培養物，培養物中的腺苷含量較低。專利CN103756916A公開地頂孢霉成品腺苷含量也僅為1.0mg/g左右。可見，現有技術對地頂孢霉的發酵時間長，培養物腺苷含量低，后期獲取培養物工序繁瑣，成本耗能高，且有效成分含量低，存在較多缺陷，不適合大規模工廠化生產，亟待改進。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提出了一種地頂孢霉的發酵工藝及培養基。

本發明的目的一是提供了一種地頂孢霉的發酵工藝，具體包括如下步驟：

（1）將地頂孢霉接種到斜面PDA固體培養基上，于25.0±2℃培養6d，制得斜面菌種；

（2）將斜面試管菌種進行一級搖瓶培養，然后移至二級搖瓶中進行種子培養，培養條件均為25.0±2℃，培養3d，得二級搖瓶培養液；

其中，搖瓶培養基為：麩皮5.0%(煮沸0.5h，取濾液)、葡萄糖1.5-2.0%、蛋白胨0.5-0.6%、磷酸二氫鉀0.08-0.1%、硫酸鎂0.02-0.03%，pH值自然。

（3）將二級搖瓶培養液按接種量2%接種到裝有種子培養基的發酵罐中培養，發酵過程中培養溫度控制在25.0±2℃，攪拌轉速控制在220rpm，空氣流量控制在1:1V/V/min，培養1d，得一級種子培養液；

（4）待一級種子培養液pH降至3.5左右，糖點在1.0%左右開始按25%接種量接種到裝有種子培養基的發酵罐中發酵，發酵過程中培養溫度控制在25.0±2℃，攪拌轉速控制在180r/min，空氣流量控制在1:1V/V/min，培養10-16h，得二級種子培養液；

其中，步驟（3）（4）所使用的種子培養基為：葡萄糖1.5-2%，蛋白胨0.5-0.6%，硫酸鎂0.07-0.08%，磷酸二氫鉀0.12-0.15%，黃豆餅粉1.5-2%，豆油0.07-0.08%，pH5-6。

（5）待二級種子培養液pH降至3.5左右，糖點在1.0%左右開始按25%接種量接種到裝有發酵培養基的發酵罐中發酵，發酵過程中培養溫度控制在25.0±2℃，攪拌轉速控制在180r/min，空氣流量控制在1:1V/V/min，pH降至3.5左右，糖點在1.0%時放罐，得到發酵液；

其中，發酵培養基為：蔗糖1.25-1.5%，葡萄糖1.25-1.5%，蛋白胨0.5-0.6%，酵母粉0.6-0.7%，硫酸鎂0.05-0.06%，磷酸二氫鉀0.12-0.15%，黃豆餅粉1.5-2.0%，磷酸氫二鉀0.12-0.15%，硫酸銨0.05-0.06%，pH 5.6-6.0；

本發明的目的二是提供一套用于地頂孢霉發酵的培養基，具體內容如下：

（1）菌種斜面培養基：PDA固體培養基；

（2）搖瓶培養基：麩皮5.0%(煮沸0.5h，取濾液)、葡萄糖1.5-2.0%、蛋白胨0.5-0.6%、磷酸二氫鉀0.08-0.1%、硫酸鎂0.02-0.03%，pH值自然；