[發明專利]一種利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法

在審

• 申請號: 202210153248.6
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114438148A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 鄧俊勁;李家洲;陳紅萍;劉淑揚
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物科學研究所
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10;C12N9/02
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.單加氧酶ycnE在降解吲哚和/或吲哚酮中的應用，其特征在于：所述的單加氧酶ycnE的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一種利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法，其特征在于：將單加氧酶ycnE添加到含有吲哚和/或吲哚酮的樣品中，反應，以實現所述的樣品中吲哚和/或吲哚酮的降解；所述的單加氧酶ycnE的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據權利要求2所述的利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法，其特征在于：

所述的樣品中包含：吲哚0～0.2g/L，和/或吲哚酮0～0.2g/L；

所述的單加氧酶ycnE的添加量，按其在體系中的終濃度為1～125mg/L計。

4.根據權利要求2所述的利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法，其特征在于：

所述的樣品中包含：吲哚0～100mg/L，和/或吲哚酮0～100mg/L；

所述的單加氧酶ycnE的添加量，按其在體系中的終濃度為25～125mg/L計。

5.根據權利要求2～4任一項所述的利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法，其特征在于：

所述的反應的體系中還含有細菌或細菌細胞破碎液，其添加量按5％v/v計。

6.根據權利要求2～4任一項所述的利用單加氧酶ycnE降解吲哚和/或吲哚酮產生靛紅的方法，其特征在于：

所述的反應的條件為溫度20～30℃，時間1～30h。

7.權利要求1或2中所述的單加氧酶ycnE的制備方法，其特征在于：

先將合成的單加氧酶ycnE的編碼序列構建到表達載體pet28a，然后將所得重組質粒轉化大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3)，最后誘導表達及純化。

8.根據權利要求7所述的單加氧酶ycnE的制備方法，其特征在于：

所述的單加氧酶ycnE的編碼序列如SEQ ID NO.1所示。

9.根據權利要求7所述的單加氧酶ycnE的制備方法，其特征在于：

所述的重組質粒的構建過程中的雙酶切位點為BamHI和EcoRI；連接體系每10μL含：pet28a為1μL、ycnE為3μL、T4連接酶為0.5μL。

10.根據權利要求7所述的單加氧酶ycnE的制備方法，其特征在于：

所述的轉化的條件為42℃熱擊70秒；

所述的誘導表達的條件為0.5mmol/LIPTG于37℃誘導2.5小時；

所述的純化通過鎳柱親和層析實現。