[發(fā)明專利]糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化磁性納米顆粒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210150392.4
• 申請(qǐng)日: 2022-02-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114441775A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王涎樺;董林毅;白晨晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/532
• 代理公司: 天津創(chuàng)信方達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 12247
• 代理人: 李京京

本發(fā)明公開(kāi)了糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化磁性納米顆粒，所述磁性納米顆粒以四氧化三鐵磁球?yàn)檩d體，在載體表面包裹一層二氧化硅，進(jìn)一步修飾氨基和醛基，接著在醛基上連接抗原并用牛血清白蛋白對(duì)活性位點(diǎn)進(jìn)行封閉，最后加入抗原的糖基化位點(diǎn)遮蔽劑進(jìn)行阻斷制備而成。所述磁性納米顆粒可以實(shí)現(xiàn)抗體的特異性捕獲或分離。本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用磁性納米顆粒和以氧化石墨烯為載體的熒光信號(hào)放大器，不僅對(duì)抗體的檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)范圍廣，并且與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)相比具有耗時(shí)短、制備簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜、儲(chǔ)存運(yùn)輸條件簡(jiǎn)單和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，涉及糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化磁性納米顆粒。

背景技術(shù)

在許多疾病，如腫瘤、炎癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展中，人類免疫系統(tǒng)能夠通過(guò)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體來(lái)抵抗疾病。因此，特異性抗體可作為疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)，抗體檢測(cè)在疾病的診斷，特別是免疫性疾病和感染性疾病中起著至關(guān)重要的作用。此外，抗體類藥物是近年來(lái)增長(zhǎng)最快的生物制藥之一。基于抗體的藥物的定量檢測(cè)對(duì)于臨床評(píng)價(jià)給藥效率、跟蹤藥物治療的毒性、判斷疾病的治療效果具有重要意義。由于人體體液中富含多種抗體，且抗體的類型和數(shù)量與病理狀況有關(guān)，因此檢測(cè)體液中的特異性抗體具有重要意義。

近年來(lái)，酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫法、電化學(xué)法和熒光免疫法已成為主要的抗體測(cè)定技術(shù)。但它們都存在一定的局限性，酶聯(lián)免疫吸附法中酶標(biāo)記抗體制備過(guò)程復(fù)雜、耗時(shí)，儲(chǔ)存條件要求較高不便運(yùn)輸；放射免疫法中的放射性物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求較高，會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)和假陽(yáng)性反應(yīng)；電化學(xué)法儀器價(jià)格昂貴、體積太大、檢測(cè)芯片量太大，仍有待改進(jìn)；熒光免疫法中熒光強(qiáng)度低、強(qiáng)背景引起的檢測(cè)困難、生物結(jié)合引起的熒光猝滅等。因此，亟待需要研發(fā)高效便捷的抗體定量檢測(cè)方法。

在糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化磁性納米顆粒中，磁性納米顆粒具有的磁性使其易于進(jìn)行富集和分離，或進(jìn)行定向移動(dòng)定位，同時(shí)球形顆粒的磁性納米粒子體積小、表面積大，固定目標(biāo)分子效率高；磁性分離方法具有高效、簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)；蛋白的糖基化位點(diǎn)被掩蔽劑阻斷可以改善背景信號(hào)。掩蔽劑，例如4-乙基苯硼酸、4-甲基苯硼酸、4-氟苯硼酸、4-三氟甲基苯硼酸、4-羥基苯硼酸、2,3-二氟苯硼酸、3,5-二氟苯硼酸、3,4,5-三氟苯硼酸、2,3,5,6-四氟苯硼酸、五氟苯硼酸。抗體的Fc片段中含有大量的碳水化合物鏈，可以被硼酸鹽親和材料特異性識(shí)別。由此，結(jié)合為公布號(hào)CN113512417A專利申請(qǐng)中提到的以氧化石墨烯為載體的熒光信號(hào)放大器對(duì)抗體進(jìn)行定量檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種創(chuàng)新的糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化磁性納米顆粒作為抗體捕獲材料對(duì)抗體進(jìn)行特異性捕獲。合成的抗體捕獲材料是以四氧化三鐵磁球?yàn)檩d體，首先在四氧化三鐵表面包裹一層二氧化硅，然后修飾氨基再修飾醛基，接著在醛基上連接抗原并用牛血清白蛋白對(duì)活性位點(diǎn)進(jìn)行封閉，最后加入抗原的糖基化位點(diǎn)遮蔽劑進(jìn)行阻斷。在應(yīng)用方面，首先抗體由于其特異性的免疫親和而被糖基化位點(diǎn)阻斷/抗原固定化磁性納米顆粒選擇性捕獲，然后加入公布號(hào)CN113512417A專利申請(qǐng)中提到的以氧化石墨烯為載體的熒光信號(hào)放大器，以氧化石墨烯為載體的熒光信號(hào)放大器上接枝的硼酸單體特異性識(shí)別抗體的Fc片段碳水化合物鏈，過(guò)量的以氧化石墨烯為載體的熒光信號(hào)放大器用磷酸鹽緩沖液洗去；加入釋放劑，使熒光物質(zhì)從石墨烯表面釋放，用熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光強(qiáng)度，即可實(shí)現(xiàn)抗體含量的定量檢測(cè)。該方法進(jìn)行抗體的超靈敏檢測(cè)與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)相比，價(jià)格低廉、制備簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、儲(chǔ)存條件簡(jiǎn)單且便于運(yùn)輸、檢測(cè)靈敏度高，更容易推廣使用。

具體的本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案；

本發(fā)明第一方面提供了一種糖基化位點(diǎn)阻斷/蛋白固定化的磁性納米顆粒，所述磁性納米顆粒為表面使用掩蔽劑阻斷糖基化位點(diǎn)的磁性納米顆粒。

在一些實(shí)施方案中，所述掩蔽劑為苯硼酸類化合物。