[發明專利]一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法

在審

• 申請號: 202210150288.5
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114437984A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 江永明;吳峰
• 申請（專利權）人: 鑫九通科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 武漢明正專利代理事務所(普通合伙) 42241
• 代理人: 劉璐

本發明涉及一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：1)將80％以上菌體形成芽孢的凝結芽孢桿菌轉入無菌水中，形成種子培養液；2)將種子培養液轉接到一級液體培養基中進行一級發酵，制成一級發酵液；3)將一級發酵液轉接到二級液體培養基中進行二級發酵，制成二級發酵液；4)將二級發酵液接入麩皮固體培養基中，混合均勻后培養60～72h，制備得到產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑。本發明提供了適用于凝結芽孢桿菌的液體培養基及液體培養產芽孢條件，且制得的產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑每克含83～132億個活菌，芽孢出芽率不低于92％，雜菌率＜0.2％，且L?乳酸含量不低于36.5g/L。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法。

背景技術

微生物制劑因其具有調節腸道功能紊亂、維持腸道內菌群平衡和提高機體健康水平及生產性能、能夠避免服用抗生素帶來的耐藥性和二重感染等功能，子啊畜牧業中的應用已得到了業界的廣泛認可。但是，目前國內常見的乳酸菌和芽孢桿菌等微生物制劑往往難以兼備生產性能優良和抗逆性強的雙重優點，使得這類添加劑在實際中的應用受到了限制。

凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)的優勢在于能形成耐熱性和耐酸性較強的芽孢，其芽孢作為活性因子耐受胃酸順利到達腸胃并定植存活的能力也較強，能夠在厭氧條件下產生L-乳酸。這些特性對促進動物營養的消化吸收、提高動物的飼料轉化率和防病促進生長起到重要作用。除具有優良生產性能外，同時還具有抗逆性強、耐高溫高壓、易貯存等獨特的生物特性，正在成為目前飼料添加劑行業的又一新寵，因此在飼料中添加能夠產L-乳酸的凝結芽孢桿菌是一個十分綠色健康的選擇。

目前制備凝結芽孢桿菌微生物制劑一般采用敞開式麩皮固態的傳統發酵工藝，采用自然風，自然溫度、濕度，其制備的凝結芽孢桿菌微生物制劑中，雜菌率高，活菌數波動大。雖然凝結芽孢桿菌在多種固體培養基上形成芽孢良好，但在普通液體培養基中卻不能形成芽孢，且固體培養的局限性必將妨礙其擴大生產及其實際應用。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的技術問題，提供一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，包括以下步驟：

1)將活化的80％以上菌體形成芽孢的凝結芽孢桿菌轉入無菌水中，使其濃度為5.0×10⁸cfu/ml～2.0×10⁹cfu/ml，形成種子培養液；

2)將種子培養液以3％～5％的接種量轉接到一級液體培養基中進行一級發酵，發酵溫度37±1℃，攪拌速率200～350rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度80～90％，發酵時間為8～16h，制成一級發酵液；

3)將一級發酵液以10％的接種量轉接到二級液體培養基中進行二級發酵，發酵溫度37±1℃，攪拌速率150～250rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度70～80％，發酵時間為12～30h，使凝結芽孢桿菌生長至對數生長末期，制成二級發酵液；

4)在無菌環境中，將二級發酵液以2％～4％的接種量接入麩皮固體培養基中，混合均勻，控制通風量為：換氣3～10次/小時，溫度30～40℃，濕度80％～90％條件下培養60～72h，培養期間翻動麩皮固體培養基，由此制備得到產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑；