[發明專利]一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法

在審

• 申請號: 202210150288.5
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114437984A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 江永明;吳峰
• 申請（專利權）人: 鑫九通科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 武漢明正專利代理事務所(普通合伙) 42241
• 代理人: 劉璐

1.一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將活化的80％以上菌體形成芽孢的凝結芽孢桿菌轉入無菌水中，使其濃度為5.0×10⁸cfu/ml～2.0×10⁹cfu/ml，形成種子培養液；

2)將種子培養液以3％～5％的接種量轉接到一級液體培養基中進行一級發酵，發酵溫度37±1℃，攪拌速率200～350rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度80～90％，發酵時間為8～16h，制成一級發酵液；

3)將一級發酵液以10％的接種量轉接到二級液體培養基中進行二級發酵，發酵溫度37±1℃，攪拌速率150～250rpm，通氣量0.8～0.9V/V·min，溶氧濃度70～80％，發酵時間為12～30h，使凝結芽孢桿菌生長至對數生長末期，制成二級發酵液；

4)在無菌環境中，將二級發酵液以2％～4％的接種量接入麩皮固體培養基中，混合均勻，控制通風量為：換氣3～10次/小時，溫度30～40℃，濕度80％～90％條件下培養60～72h，培養期間翻動麩皮固體培養基，由此制備得到產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑；

其中，一級和二級液體培養基均含MnSO₄0.5～2.0g/L、MgSO₄0.4～1.0g/L、KH₂P0₄0.5～3g/L、K₂HP0₄0.5～3g/L、NaCl 3～10g/L、蛋白胨5～20g/L和牛肉膏3～10g/L，且pH為7.0±1.0；麩皮固體培養基由以下按質量份數計的原料混合配制而成：麩皮40～90份、魚粉0.1～2份、硫酸銨0.1～0.6份、磷酸氫二鉀0.1～0.6份、硫酸錳0.1～0.5份和水10～60份。

2.根據權利要求1所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟1)中，制備種子培養液的具體操作如下：首先將凝結芽孢桿菌接種到牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基試管斜面，37℃下培養24h，然后接種到牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基茄子瓶斜面，37℃下培養至80％以上菌體形成芽孢時，再轉入無菌水中，使其形成濃度為5.0×10⁸cfu/ml～2.0×10⁹cfu/ml的種子培養液。

3.根據權利要求2所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基含蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L、NaCl 5g/L和瓊脂15～20g/L，且pH為6.8～7.0。

4.根據權利要求1所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟4)中，培養期間每隔3～5h翻動一次麩皮固體培養基。

5.根據權利要求1所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟4)中，將制備得到的產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑經55～60℃真空干燥處理后，包裝成成品，成品檢測合格后，可作為微生物制劑產品。

6.根據權利要求1所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)和3)中，一級和二級液體培養基在接種前，于121℃條件下，滅菌20min。

7.根據權利要求1所述的一種產乳酸凝結芽孢桿菌微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟4)中，麩皮固體培養基的配制方法為：將硫酸銨、硫酸氫二鉀和硫酸錳先用水溶再與其余固體原料混合，攪拌均勻后，在壓力、溫度分別為1.05～1.3Kg/cm³、121～125℃的條件下，滅菌30～40min，冷卻至40～50℃即得麩皮固體培養基，備用。