[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)糧食中重金屬鉛離子的免疫學(xué)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210150261.6
• 申請(qǐng)日: 2022-02-18
• 公開（公告）號(hào): CN114527281A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王杰文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳中檢聯(lián)檢測(cè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/531;G01N33/53;C07K16/44
• 代理公司: 深圳市精英創(chuàng)新知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44740
• 代理人: 林燕云

一種快速檢測(cè)糧食中重金屬鉛離子的免疫學(xué)方法屬于免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，該方法包括以下步驟：(1)取載體蛋白、雙功能鰲合劑、Pb(NO₃)₂及三乙胺，于HEPES緩沖溶液中溶解，用超濾或透析的方法去除未反應(yīng)的低分子物質(zhì)，剩余物于HEPES緩沖溶液中保存，分裝；(2)將鉛離子完全抗原包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，接著用質(zhì)量百分比為3％的BSA封閉，在37℃孵育，用PBST溶液洗滌得到包被好完全抗原并封閉的ELISA酶標(biāo)板；(3)將鉛離子完全抗原包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)封閉，再加入待檢樣品，PBST溶液洗滌，再加入抗鉛單克隆抗體；再用PBST溶液洗滌，加入酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG，孵育后用PBST溶液洗滌，再加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，根據(jù)顯色的深淺對(duì)樣品中鉛離子含量進(jìn)行定性和半定量分析。

本發(fā)明屬于免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，主要涉及一種快速檢測(cè)糧食中重金屬鉛離子的免疫學(xué)方法。

背景技術(shù)

重金屬污染就是由重金屬過量累積引起的污染，是導(dǎo)致環(huán)境惡化的一個(gè)重要因素，重金屬污染物進(jìn)入人體也會(huì)對(duì)人體造成極大的危害。社會(huì)經(jīng)濟(jì)的蓬勃發(fā)展以及生活質(zhì)量的不斷提高，人們對(duì)食品安全問題愈發(fā)關(guān)注。

鉛是環(huán)境污染物中毒性很大的一種重金屬,在自然界中分布廣，工業(yè)用途多。由于鉛是多親和性毒物，易在人體的某些器官中積蓄起來(lái)造成慢性中毒危害人體健康，主要損害神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、心血管及消化系統(tǒng)，對(duì)兒童的作用更為敏感。一些行業(yè)通過頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鉛的最大允許量，其中糧食中的鉛現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是0.4mg/kg。

傳統(tǒng)上，環(huán)境農(nóng)產(chǎn)品中重金屬殘留的檢測(cè)技術(shù)主要依靠大型儀器，如原子吸收分光光度法、電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法、電感耦合等離子體質(zhì)譜分析、原子熒光光譜分析等，這些重金屬檢測(cè)方法雖然能精確測(cè)量樣品中重金屬含量，但檢測(cè)相對(duì)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、且費(fèi)用昂貴，此外，這些方法需大量的樣品預(yù)處理，并在大型分析設(shè)備上進(jìn)行，需要專業(yè)人員操作，難以應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。由于上述的不足之處，檢測(cè)的樣品數(shù)一般會(huì)少于最佳檢測(cè)數(shù)量，導(dǎo)致在隨后進(jìn)行的重金屬污染程度和風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估工作存在較大的不確定性，受污農(nóng)產(chǎn)品的監(jiān)管也難以及時(shí)有效開展。

免疫學(xué)檢測(cè)方法是一種新型、高效快速的檢測(cè)方法，是采用人工制備的抗重金屬抗體與抗原之間的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，快速準(zhǔn)確的表達(dá)所檢樣品中重金屬含量。重金屬的免疫檢測(cè)方法具有快速、廉價(jià)、簡(jiǎn)便、靈敏、特異的優(yōu)點(diǎn)，理論上能應(yīng)用于能產(chǎn)生合適抗體的任何污染物質(zhì)，可便攜而進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)，克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的缺點(diǎn)。因此利用免疫學(xué)檢測(cè)方法，能夠快速、準(zhǔn)確、便捷地檢測(cè)糧食中鉛離子的含量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有背景技術(shù)中存在的不足，而提供的一種快速檢測(cè)糧食中重金屬鉛離子的免疫學(xué)方法。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種快速檢測(cè)糧食中重金屬鉛離子的免疫學(xué)方法。

包括以下步驟：

(1)鉛離子完全抗原的制備：取4.5～10.0mg重量份載體蛋白、0.8～1.8mg重量份雙功能鰲合劑、0.7～0.8mg重量份Pb(NO₃)₂及1.4～4.5mg重量份三乙胺，于1～3ml體積份的HEPES緩沖溶液中溶解，15～30℃溫度下振蕩8～24h后，用超濾或透析的方法去除未反應(yīng)的低分子物質(zhì)，剩余物于HEPES緩沖溶液中保存，分裝，得到鉛離子完全抗原；

(2)包被好完全抗原并封閉的ELISA酶標(biāo)板的制備：將步驟(1)所得的鉛離子完全抗原包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi),鉛離子完全抗原的加入量為100ng/well；接著用質(zhì)量百分比為3％的 BSA封閉，在37℃孵育1～5h，于吸水紙上拍干，用PBST溶液洗滌3次得到包被好完全抗原并封閉的ELISA酶標(biāo)板。其中PBST的制備是由0.01M、pH值為7.4的PBS緩沖液與 Tween-20按體積比1000:0.5混合得到；