[發(fā)明專利]一種蒜氨酸的分離純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210144624.5 | 申請日： | 2022-02-17 |
| 公開（公告）號： | CN114478331B | 公開（公告）日： | 2023-08-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 盧艷敏;崔波;王娜;柴晴晴 | 申請（專利權(quán)）人： | 齊魯工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C07C315/06 | 分類號： | C07C315/06;C07C317/48 |
| 代理公司： | 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250399 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 氨酸 分離 純化 方法 | ||
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種蒜氨酸的分離純化方法。前期通過雙水相處理，后采用醇沉除去多糖、無機(jī)鹽；然后采用30%磷酸二氫鈉?乙醇?丙酮為溶劑體系，通過高速逆流色譜（HSCCC）對蒜氨酸進(jìn)行分離純化，該方法具有操作簡便對樣品的前處理要求低，耗時短，處理量大、不存在吸附、降解和污染回收率高等優(yōu)勢。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種蒜氨酸的分離純化方法。
背景技術(shù)
通過天然提取的方式獲得的蒜氨酸粗提液中會摻雜大量的大蒜多糖物質(zhì)及少量水溶性蛋白質(zhì)。因此，對蒜氨酸進(jìn)行分離純化和精制顯得很有必要，目前研究較多是離子交換柱色譜法分離純化蒜氨酸。但作為固定相的離子交換樹脂具有傳質(zhì)較慢、柱效低離子、易溶脹和收縮、不耐高壓等缺點。這些問題限制了蒜氨酸的高效制備，開發(fā)新型高效的制備技術(shù)意義深遠(yuǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本專利采用的高速逆流色譜（HSCCC）技術(shù)是一種較新型的液—液分配色譜，具有操作簡便對樣品的前處理要求低，耗時短，處理量大、不存在吸附、降解和污染回收率高等優(yōu)勢。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種蒜氨酸的分離純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）采用硫酸銨、氯化鈉、正丙醇、pH?為2.4伯瑞坦-羅比森緩沖溶液組成的雙水相體系，處理滅酶蒜粉，下相即為粗提液；
（2）向步驟（1）的粗提液通過醇沉除去多糖、無機(jī)鹽，離心，將上清液減壓回收乙醇，烘干，得蒜氨酸粗提物固體粉末；
（3）采取30%磷酸二氫鈉-乙醇-丙酮為溶劑體系，取步驟（2）的固體粉末加入到已達(dá)到平衡之后的溶劑系統(tǒng)中，并超聲使其完全溶解后，從進(jìn)樣閥中注入高速逆流色譜儀，采用高速逆流色譜儀進(jìn)行純化。
優(yōu)選地，步驟（3）溶劑體系的30%磷酸二氫鈉-乙醇-丙酮的體積比為6:3:1.5。
優(yōu)選地，步驟（3）的溶劑體系平衡后分為上下兩相，上相作為高速逆流色譜儀的固定相，下相為高速逆流色譜儀的流動相。
優(yōu)選地，步驟（2）的固體粉末加入到已達(dá)到平衡之后的上、下兩相溶劑系統(tǒng)，并超聲使其完全溶解；所述的固體粉末與上、下兩相溶劑的加入量比值為400mg:10mL:10mL。
上述蒜氨酸的分離純化方法，所述步驟（3）中高速逆流色譜儀的具體參數(shù)為：將固定相以?20?m?L/min?的流速泵入高速逆流色譜儀的螺旋管中，待固定相充滿螺旋管后，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整轉(zhuǎn)速為?1050?rpm，同時流動相以?1.8?m?L/min?的流速泵入充滿固定相后的螺旋管中，待末端有流動相流出時，即螺旋管中上下相已達(dá)到動態(tài)平衡：然后將備好的樣品溶液從進(jìn)樣閥中注入高速逆流色譜儀，經(jīng)過高速逆流色譜分離后，在?25~30min?收集到目標(biāo)餾分。
優(yōu)選地，所述步驟（1）中雙水相體系為：19%?(w/w)?硫酸銨/8.54%?(w/w)?氯化鈉/20%?(w/w)正丙醇/?pH?為?2.4伯瑞坦-羅比森緩沖溶液組成的雙水相體系。
高速逆流色譜（HSCCC）原理是基于樣品在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的互不混溶的兩相溶劑間分配不同而獲得分離，因而無須任何固體載體或支撐體，能達(dá)到在短時間內(nèi)實現(xiàn)高效分離和制備，可以達(dá)到幾千個理論塔板數(shù)。將HSCCC用于蒜氨酸的分離，不僅實現(xiàn)了蒜氨酸分離的方法創(chuàng)新，而且對于降低分離成本，提高分離效率，推動蒜氨酸規(guī)模化生產(chǎn)具有重要意義。
本發(fā)明的有益效果：
與普通色譜技術(shù)相比，本方案無須任何固體載體或支撐體，能達(dá)到在短時間內(nèi)實現(xiàn)高效分離和制備，蒜氨酸回收率高，純度高,濃縮后可直接進(jìn)行結(jié)晶制備高純度蒜氨酸產(chǎn)品。
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